PCR引物二聚體處理方法
如果出現了引物二聚體，有許多方法可以減少或消除反應中的引物二聚體。
1、 首先是優(yōu)化熱循環(huán)條件，這主要是提高退火溫度。大多數情況下，兩步循環(huán) (由 95°C 變性步驟直接進(jìn)入60°C 退火和延伸步驟) 有利于強效擴增，因此引物設計時(shí)設定的成功退火溫度為 60°C。
2、可降低引物濃度，甚至采用不同的正向引物和反向引物的比值也有一定的幫助。大多數情況下，每條引物的理想濃度為 200 nM，但如有需要，可將濃度降至 60 nM。
3、鎂的合適濃度一般約為 3 mM。高于此濃度易形成引物二聚體。
4、如果未對引物形成二聚體的傾向進(jìn)行評估，則應補充評估并考慮重新設計 (如有需要)。通常情況下，使用熱啟動(dòng) DNA 聚合酶，并在冰上進(jìn)行反應。
5、在理論上，針對同一靶點(diǎn)應同時(shí)檢測多個(gè)引物組。這實(shí)際上可以節省大量時(shí)間，因為如果這些引物中的一個(gè)能立即發(fā)揮作用，則可以減少花費在優(yōu)化過(guò)。