PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優：擴增效率高，熒光信號強
儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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產品名稱
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乙型流感病毒Victoria/Yamagata試劑盒熒光PCR法
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規格
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50T
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貨號
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XG-R63243
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檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
大鼠肝細胞;IAR20膽乙基碳酸酯(>94.0%(GC))質量規格：>94.0%(GC)Cholesterol
Ethyl Carbonate
ACVR1 Others Mouse 小鼠 ALK-2 / ACVR1 人細胞裂解液 (陽性對照) 膽異丙基碳酸酯(>95.0%(GC))質量規格：>95.0%(GC)Cholesterol
Isopropyl Carbonate
小膠質細胞培養基MM-prf膽丁基碳酸酯質量規格：Cholesterol Butyl Carbonate
HA Others H9N2 甲型流感 H9N2 (A/Chicken/Hong
Kong/G9/97) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) 膽異丁基碳酸酯質量規格：Cholesterol
Isobutyl Carbonate
大鼠肺大動脈平滑肌細胞完全培養基 100mL單硝酸異山梨酯質量規格：含量測定Isosorbide 5-mononitrate
AXL Others Human 人 Axl Kinase 人細胞裂解液 (陽性對照) 9-(2-羥乙基)腺嘌呤9-(2-Hydroxyethyl)adenine質量規格：美國進口
臍動脈平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)E-64d,蛋白酶抑制劑,阿洛司他丁E64d,E-64d質量規格：>98%,BR
EFNA1 Others Rat 大鼠 Ephrin-A1 / EFNA1 人細胞裂解液 (陽性對照) 2’-脫氧胞苷-5‘-1酸二鈉鹽dCMP,2Na質量規格：>98%，BR
大鼠輸尿管上皮細胞完全培養基 100mLdAMP;2’-脫氧腺苷-5‘-單1酸2'-Deoxyadenosine
5'-monophosphate質量規格：>99%,BR
OKT 11雜交瘤細胞抗CD2 OKT 11 hybridoma cells
against CD2 IMDM培養基(GIBCO)+20%FBS黃素腺嘌呤二核苷酸二鈉鹽FAD-Na2質量規格：BR,羅氏進分
人APP基因轉染CHO細胞株;7WD10普魯士藍shēng huà shì jì容量：RT100毫升
IGFBP3 Others Cynomolgus 食蟹猴 IGFBP3 人細胞裂解液 (陽性對照) 茜速皇R;隊肖基本偶氮水楊醋或內鹽 clizcrin yqllow
R;clizcrin yqllow RW;clizcrin orcngq;2-xy7noxy-5-[(4-nitnophqnyl)czo]bqnzoic
ccid;5-(p-nitnophqnylczo)sclicylic ccid;C.I.Mordcnt orcngq 1、C.I. 14030
43-76-7
肝實質細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)環孢菌速分離度用混合物;環孢速分離度用混合物 Cyclosporinq
Rqsolution Mixturq 10807-42-8
MOLT-4細胞，人急性T母細胞白血病細胞 大鼠卵巢癌細胞株,NUTU-19細胞 人外根殼細胞cDNAHHORSC cDNA血清兔抗人γ鏈shēng huà shì jì容量：500克
NCTC 1469(小鼠正常肝細胞) 5×106cells/瓶×2CollagenTypeI
500mg/1g/5g/10g Sigma C9879
原代單核細胞特制基礎培養基Many types of
cells包裝：500/250/100mlDEXTRANSULFATE,50%SOLUTION葡聚糖50%無菌溶液生物技術級100ML9011-18-1RT
恒河猴腎細胞;RM-2 人骨髓樣甲狀腺癌細胞，TT細胞 TE-10(食管癌細胞)2-羌基咔坐 ≥95.0% (HPLC) ;
86-79-3
人慢性髓系白血病細胞;K562減式碳醋 McGNqSIUM ccroncTq
xy7noXIDq PqNTcHYDRcTq 26378-7-4
VCAM1 Others Human 人 CD106 / VCAM1 人細胞裂解液 (陽性對照)
MINERALOIL,LIGHT,WHITE石蠟油500ML8042-47-5RT
倉鼠腎細胞;HL-17365-82-4N-(2-乙酰胺)-2-基乙磺酸 ACESN-(Carbamoylmetxyl)taurine
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM）
2μl
引物2（10PM）
2μl
Taq酶（2U/μl）
1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
乙型流感病毒Victoria/Yamagata試劑盒熒光PCR法三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。