副流感病毒2型試劑盒熒光PCR 法

產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優：擴增效率高，熒光信號強

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
小鼠氣管平滑肌細胞完全培養基 100mL鹽酸丙美卡因質量規格：>98%,BRProparacaine HCl

EJ人膀胱癌細胞 Human bladder cancer cell line EJ 1640+10% FBSN-芐氧羰基-L-絲氨酸質量規格：>98.5%,BRZ-Ser-OH

IL36B Protein Mouse 重組小鼠 IL1F8 / IL36b 蛋白N-芐氧羰基-L-蘇氨酸質量規格：0.98Z-Thr-OH

NCI-H23(人非小細胞肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 THP-1(單核細胞白血病)N-芐基甘氨酸質量規格：>98.0%,BRN-Benzylglycine

CL-0383MDA-MB-436(人癌細胞)5×106cells/瓶×2扎那米韋質量規格：>98%,BR,一水物Zanamivir
CL-0206SGC7901(人胃癌細胞)5×106cells/瓶×2草酸銨(98~101%,BR)Ammonium oxalate hydrate質量規格：98~101%,BR

MLF, 小鼠成纖維細胞5'-單1酸腺苷(>95%，BR)Adenosine-5'-monophosphate, free acid質量規格：>95%，BR

Sars結構蛋白表達株;293sars181A 人膀胱上皮細胞完全培養基 100mL硫酸鋁十六水(>98%,BR)Aluminum sulfate, hexadecahydrate質量規格：>98%,BR

人急性早幼粒白血病細胞;HL-60葡萄糖-6-1酸脫氫酶，硫酸銨懸浮液Glucose-6-phosphate dehydrogenase質量規格：酶活>200 NADP units/mg，BC

PPP3R1 Others Human 人 PPP3R1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 蘋果酸脫氫酶(>12,000U/ml，BC)Malate dehydrogenase質量規格：>12,000U/ml，BC
SUP-B15人Ph+急淋白血病細胞系 SUP-B15 acute lymphoblastic leukemia cell line Ph+ IMDM培養基(GIBCO)+20%FBS二苯基砜-4,4'-二氯-3,3'-二磺酸二鈉(>98.0%(HPLC)(T))質量規格：>98.0%(HPLC)(T)Di Diphenylsulfone-4,4'-dichloro-3,3'-disulfonate

成纖維細胞生長因子雙酚 C(>98.0%(GC))質量規格：>98.0%(GC)2,2-Bis(4-hydroxy-3-methylphenyl)propane

293FT(人胚腎細胞) 5×106cells/瓶×2 支氣管成纖維細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)4,4'-異亞丙基二苯氧基乙酸(>98.0%(HPLC)(T))質量規格：>98.0%(HPLC)(T)4,4'-Isopropylidenediphenoxyacetic Acid

人心臟成纖維細胞cDNAHCF cDNA四溴雙酚A(>98.0%(GC)(T))質量規格：>98.0%(GC)(T)Tetrabromobisphenol A

IL1RL1 Others Human 人 IL1RL1 / ST2 ( isoform A ) 人細胞裂解液 (陽性對照) 2-乙酰氨基-2-脫氧-D-半乳糖醛酸質量規格：美國進口2-Acetamido-2-deoxy-D-galacturonic Acid
色素細胞生長生長添加物MelGSPCRMARKERWITHLOADINGDYEPCR Marker, 含上樣緩沖液生物技術級500 lFrozen

RSPO1 Others Human 人 RSPO1 / R-Spondin-1 (aa 1-146) 人細胞裂解液 (陽性對照) (1R)-(+)- (1R)-(+)-cLPHc-PINqNq 7782-70-8

CSSTH1 中華鱉心肌來源細胞典化 Lqcd(II) iodidq 10101-63-0

T-107B中性蛋白酶(含100mL酶解緩沖液)10mL1,2,4,5-本四甲羧酸二酐，英文名或英文縮寫：PMDA，級別：BR，99%，規格：25克

RGC-5, 小鼠視網膜神經節細胞24589-78-4N-甲基-N-(基硅烷基)三扶乙酰胺N-metxyl-N-(trimetxylsilyl)trifluonoeetemi7e
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
副流感病毒2型試劑盒熒光PCR 法（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。