PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優：擴增效率高，熒光信號強
儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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產品名稱
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綠膿桿菌試劑盒熒光PCR法
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規格
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50T
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貨號
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XG-R63323
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檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
小鼠腮腺細胞完全培養基 100mLL-谷氨酸5乙酯質量規格：0.985H-Glu(OEt)-OH
HUVEC[HUV-EC-C]人臍靜脈內皮細胞 Human umbilical vein
endothelial cells HUVEC[HUV-EC-C] DMEM+10%FBSN-乙酰-DL-亮氨酸質量規格：0.98N-Acetyl-DL-leucine
IL18BP Protein Mouse 重組小鼠 IL18BP 蛋白 (His 標簽)N-碳芐氧基賴氨酸,N6-Cbz-L-賴氨酸質量規格：98%，BRN6-Cbz-L-Lysine
PA-1(人卵巢腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 H9c2(2-1)(大鼠心肌細胞)DL-賴氨酸質量規格：>98%,BRDL-Lysine
CL-0269CW-2(人結腸癌細胞)5×106cells/瓶×2DL-精氨酸鹽酸鹽質量規格：>98%,BRDL-Arginine
CRT(人神經膠質瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 腸靜脈內皮細胞Many types of
cells包裝：5 × 105方(1ml)草酸亞錫(>98%,BR)Tin
(II) oxalate質量規格：>98%,BR
人脊髓星形膠質細胞HA-sp二氧化錫(> 99%,BR)Tin (IV) oxide質量規格：> 99%,BR
IL2RA Others Cynomolgus 食蟹猴 IL2RA 人細胞裂解液 (陽性對照) 硫酸亞鈦(>98%,BR)Titanium
(III) sulfate質量規格：>98%,BR
犬腎細胞;MDCK(NBL-2)硫酸鈦(>96%,BR)Titanium (IV)
sulfate質量規格：>96%,BR
801-D細胞，人巨細胞性肺癌細胞 轉入Tet-off調控，含EGFP基因的CHO細胞,CHO-AA8細胞 CM-M026小鼠骨髓基質細胞完全培養基100mL檸檬酸三丁酯(>98%,BR)Tributyl 質量規格：>98%,BR
NCI-H1395人肺腺癌細胞 Human lung adenocarcinoma
cell line NCI-H1395 RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS[Tyr9]- β-促 (豬)質量規格：>95%,BR[Tyr9]- β-MSH (porcine)
FAM3D Protein Human 重組人 FAM3D 蛋白 (His 標簽)α-心鈉素(1-28), human質量規格：>95%,BRα-ANF(1-28), human
293來源病毒包裝細胞;ΦA 人上皮細胞完全培養基 100mLα-促質量規格：>95%,BRα-MSH
人髓核細胞總RNAHNPC NAβ-淀粉樣蛋白(1-42),人質量規格：>95%,BRβ-Amyloid Peptide
(1-42), human
REG1A Others Cynomolgus 食蟹猴 REG1A / PSPS 人細胞裂解液 (陽性對照) [Nle8’18,Tyr34]-甲狀旁腺(7-34)酰胺 (牛)質量規格：>95%,BR[Nle8’18,Tyr34]-pTH
(7-34) amide (bovine)
CL-0252A2(人腺樣囊性癌細胞)5×106cells/瓶×2本扎錄，英文名或英文縮寫：HDBAC，級別：IND，規格：25克
人低分化肺腺癌細胞;SK-LU-1 大鼠腦靜脈血管內皮細胞完全培養基 100mL雌摸司汀鱗醋內 (17-bqtc)-qstrc-1,3,5(10)-triqnq-3,17-diol 3-(bis(2-chloroqthyl)ccrbcmctq)
17-(dixy7nogqnphosphctq) diwo7ium sclt 202-73-9
MMQ 小鼠垂體瘤細胞申醋 LqcD(II) cRSqNcTq 3687-31-8
TIMP2 Others Human 人 TIMP2 / TIMP-2 人細胞裂解液 (陽性對照) 4-甲基-1H-咪唑，英文名或英文縮寫：4-metxylimidazole，級別：LR，規格：500克
色素細胞生長添加物(不含TPA)MelGS-22304-96-3N-芐氧羰基-L-天冬堿N-Benzyloxycarbonyl-L-asparagine
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM）
2μl
引物2（10PM）
2μl
Taq酶（2U/μl）
1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
綠膿桿菌試劑盒熒光PCR法三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。