鮑曼不動桿菌試劑盒熒光PCR法

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優：擴增效率高，熒光信號強

PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。

檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

人小梁網細胞cDNAHTMC cDNAD-焦谷氨酸質量規格：0.98D-Pyroglutamic acid

PT-67細胞，病毒轉染小鼠細胞 人肺巨細胞癌(PG)的高轉移亞系,PG-BE1細胞 腸微血管內皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)D-環丙基丙氨酸質量規格：BRD-Cyclopropylalanine

犬腎細胞;MDCK(NBL-2)D-叔亮氨酸鹽酸鹽質量規格：BR，98.5%D-tert-Leucine

TACSTD2 Others Human 人 OP2 / TACSTD2 人細胞裂解液 (陽性對照) DTAC；十二烷基基氯化銨質量規格：>99%,BRDodecyltrimethylammonium chloride(DTAC)

CL-0282HO-8910PM(人高轉移卵巢癌細胞)5×106cells/瓶×2CTAC;十六烷基基氯化銨質量規格：>99%CTAC
CSF1R Others Human 人 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸阿米洛利雜質（4-氨基-6-氯-1，3-苯基二硫酰胺）（標準品）4-amino-6-chloro-1,3-benzenedisulfonamide質量規格：供檢查用

CM-H102表皮角化細胞完全培養基100mL氨基甲酰舍曲林葡萄糖苷酸Sertraline Carbamoyl Glucuronide質量規格：美國進口

HCT116, 人結直腸癌細胞 垂體瘤,AtT20細胞 COS-7(非洲青猴腎細胞)(1S,4R)鹽酸舍曲林(1S,4R) Sertraline 質量規格：美國進口

小鼠胚胎成纖維細胞;PA317氨基他達那非Amino Tadalafil質量規格：美國進口

CD86 Others Mouse 小鼠 CD86 / B7-2 人細胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸特拉唑嗪Terazosin 質量規格：美國進口
小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-B4 I型膠原酶(含10mL酶解緩沖液) 1mL1,4,8,11-四氮雜環十四烷-1,4,8,11-四乙酸四乙酯(>97.0%(GC))質量規格：>97.0%(GC)Tetraethyl 1,4,8,11-Tetraazacyclotetradecane-1,4,8,11-tetraacetate

Raji，人Butt's瘤細胞 Human1,4,7,10-四氮雜環十二烷-1,4,7-三乙酸三叔丁酯(>93.0%(N))質量規格：>93.0%(N)Tri-tert-butyl 1,4,7,10-Tetraazacyclododecane-1,4,7-triacetate

FAS Others Human 人 CD95 / Fas / TNFRSF6 人細胞裂解液 (陽性對照) 1,4,7,10-四氮雜環十二烷-1,4,7,10-四乙酸三叔丁酯(>97.0%(T))質量規格：>97.0%(T)Tri-tert-butyl 1,4,7,10-Tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetate

人胎盤絨膜癌細胞;BeWo4-叔丁基杯[8]芳烴(>98.0%(HPLC))質量規格：>98.0%(HPLC)4-tert-Butylcalix[8]arene

CLEC5A Others Cynomolgus 食蟹猴 CLEC5A / MDL1 / MDL-1 人細胞裂解液 (陽性對照) 1,4,5,6-四氫-5,6-二氧-2,3-吡嗪二甲腈(>98.0%(HPLC)(T))質量規格：>98.0%(HPLC)(T)1,4,5,6-Tetrahydro-5,6-dioxo-2,3-pyrazinedicarbonitrile
NG108-15 大鼠小鼠雜合神經膠質瘤細胞Anisomycin回香霉素500U高，98%

COL2A1 Others Human 人 COL2A1 (aa 1242-1487) 人細胞裂解液 (陽性對照) 1,2,4-本三酚 99% 1,2,4-Bqnzqnqtriol 233-73-3

鮑曼不動桿菌試劑盒熒光PCR法非洲綠猴腎細胞;VERO-76言醋米托醌 (HPLC) Mitoxcntronq 6271-80-9

Spike Others MERS-CoV 中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein fragme (aa 383-502) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) ABTSsubstrateliquid2,2′-聯-雙(3-乙基本并噻唑啉-6-磺酸)鹽底物25克AR，60%

胎兒成纖維細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)145069-56-3Fmoc-鏈接劑4-[(2,4-Dimetxoxypxenyl)(Fmoc-amino)metxyl]pxenoxyacetic acid