原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經過n個熱循環擴增,擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據鮑皰疹樣病毒保守序列設計的專一性引物,與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測,避免后續污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應體系的熒光定量 PCR。
6. 本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
儲存條件:-20℃以下,有效期12個月。
產品名稱:柯薩奇病毒A10型試劑盒熒光PCR法
產品貨號:XG-R63366
規格:50T
分類:熒光PCR法
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
實驗外包:
1.基因組學:基因芯片、SNP檢測、DNA甲基化檢測、生物信息學分析
2.轉錄組學:microRNA芯片、LncRNA芯片、表達譜芯片、RNA-seq
3.蛋白質組學:2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因檢測:DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白質檢測:Western blot、Co-ip EMSA、CHIP、熒光、ELISA
6.病理檢測:HE染色、特殊染色、組織切片、組化、流式細胞分選
7.代謝組學:GC-MS、LC-MS、NMR
8.細胞及動物模型:原代細胞、細胞模型、動物模型構建
檢測方法
1.SYBRGreenⅠ法:
在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,發射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加完全同步。
SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法:
探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物的形成完全同步。
應用案例:
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DNA 片段作為陽性對照。
2.標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
8.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設置 qPCR 反應(20 μL 體系,在樣品制備室進行)
9.在 PCR 管中加入下列成分(待測樣品需要做三次重復,下表只列出一次。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后*后加)
大鼠表皮色素細胞完全培養基 100mL棕櫚酸膽酯(>97.0%(T))質量規格:>97.0%(T)Cholesterol
Palmitate
LLC-MK2恒河猴腎細胞 Ganges RIver LLC-MK2 monkey
kidney cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS正辛酸膽酯(>95.0%(GC))質量規格:>95.0%(GC)Cholesterol
n-Octanoate
IFNA4 Protein Human 重組人 IFNα4 / IFNa4 /
Ierferon alpha-4 蛋白 (His 標簽)油酸膽酯(>85.0%(GC))質量規格:>85.0%(GC)Cholesterol
Oleate
MDA-MB-175VII(人導管癌細胞) 5×106cells/瓶×2 BRL 3A(大鼠肝細胞)氯化膽(來自牛脂)(>87.0%(GC))質量規格:>87.0%(GC)Cholesteryl
Chloride from Beef Fat
5-8F, 人高轉移鼻咽癌細胞系血管緊張素 片段1-7醋酸鹽水合物質量規格:美國進口Angiotensin
Fragment 1-7 acetate salt hydrate
FCGR2 Others Mouse 小鼠 CD32 / FCGR2B 人細胞裂解液 (陽性對照) 酸棗仁皂苷A(標準品)Jujuboside A質量規格:HPLC≥98%,標準品
PK(15) 豬腎細胞D-山梨醇D-Sorbitol質量規格:>98%,BR
犬腎細胞系/野生型;MDCK/wildn-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷(OGP)N-Octyl-β-D-glucopyranoside質量規格:>98%,用于蛋白分析
GBC-SD, 人膽囊癌細胞L-核糖L-(+)-Ribose質量規格:>98%,BR
人低分化肺腺癌細胞;GLC-82 [GLC82] 大鼠食管上皮細胞完全培養基 100mLL-核糖(標準品)L-(+)-Ribose質量規格:>98%,標準品
GRN Protein Human 重組人 Granulin / GRN /
Progranulin 蛋白 (His 標簽)甜蜜素shēng huà shì jì容量:2~8℃5克
人肝細胞;HL-7702[L-02] 人外周血白細胞完全培養基 100mL5′-核苷酸酶 5′-Nucleotidase
human 9027-73-0 500U 通用試劑
人胚腎上皮細胞系;KiMA蒙脫土 K-CcTcLYST 1318-93-0
BPIFB1 Others Human 人 BPIFB1 / LPLUNC1 人細胞裂解液 (陽性對照) Cadmium鎘250毫克BR,97%
CL-0351Hep B1.2(人肝癌細胞)5×106cells/瓶×256613-80-0D-本甘醇D-Plenylglycinol
小鼠胚胎成纖維細胞;3T3-L12-嘧啶基,英文名或英文縮寫:2-Aminopyrimidine,級別:CP,97%,規格:500克
CLEC14A Others Mouse 小鼠 CLEC14A / EGFR-5 人細胞裂解液 (陽性對照) 鄰羥基 2-Hydroxybenzyl
alcohol,99% 1990-1-7 25G 通用試劑
倉鼠/小鼠雜交瘤細胞;145-2C11L-組安醋言醋鹽 L-Histidinq xy7nochloridq
monohydrctq 2934-9-
IL11RA Others Canine 狗 IL11RA / IL-11RA / IL11Rα 人細胞裂解液 (陽性對照) 糖原Ⅱ500克
WM451, 人色素瘤細胞5061-21-2α-溴代-γ-丁內酯2-Bromo-4-butanolide
PCR服務:
公司推出,該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規PCR相比,它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化;比較不同組織的mRNA表達差異;驗證基因芯片,siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務,全部實驗皆使用進口試劑完成,主要定量PCR儀器。
柯薩奇病毒A10型試劑盒熒光PCR法1、熒光定量PCR服務要求:
(01)請您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。
(02)請提供已知的全長基因序列。
(03)請提供盡可能詳細的背景資料:DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
(01)引物(探針)設計與合成。
(02)提取DNA/RNA,樣本逆轉錄成cDNA。
(03)進行Real Time PCR實驗,進行實驗結果分析。
(04)實驗完成后,提供完整的實驗報告(含軟件分析結果)及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準:
我公司根據客戶的樣品數量進行不同的收費標準。