PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優：擴增效率高，熒光信號強
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產品名稱
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脊髓灰質炎病毒2型試劑盒熒光PCR法
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規格
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50T
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貨號
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XG-R63395
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儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM）
2μl
引物2（10PM）
2μl
Taq酶（2U/μl）
1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
TOV21G人卵巢癌細胞 Human ovarian cancer cell
line TOV21G 1640+10FBS%蛋白酶3底物1m，熒光質量規格：>95%,BRCaspase
3 Substrate 1m(Apopain), fluorogenic; Ac-DEVD-AMC
NRG1 Protein Human 重組人 NRG1-beta 1 蛋白 (ECD)肽B;天蠶絲肽質量規格：>95%,BRCecropin
B
MX-1(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2 腮腺細胞Many types of
cells包裝：5 × 105方(1ml)卡律蝎質量規格：>95%,BRCharybdotoxin
小氣道平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)促皮質素釋放因子，綿羊質量規格：>95%,BRCorticotropin
Releasing Factor,ovine
IL9 Others Human 人 IL-9 / Ierleukin-9 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 蛋白激酶C（19-36）；蛋白激酶C選擇性抑制蛋白質量規格：>95%,BRProtein
Kinase C (19-36);Protein Kinase C Selective Inhibitor Protein
GUCA1A Others Human 人 GCAP1 / GUCA1A 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 補骨脂酚(標準品)Bakuchiol質量規格：HPLC≥98%，標準品
腎系膜細胞Many types of cells包裝：5 ×105方(1ml)DL-beta-苯丙氨酸(>98%，BR)DL-beta-Phenylalanine質量規格：>98%，BR
團頭魴尾鰭細胞;WCF 人卵巢畸胎瘤細胞，PA-1細胞 SK-OV-3(卵巢癌細胞)DL-肉堿鹽酸鹽DL-Carnitine 質量規格：>98%,BR
人皮膚色素瘤細胞;SK-MEL-1DL-鳥氨酸鹽酸鹽(>98%，BC)DL-Ornithine,
mono質量規格：>98%，BC
EFNA3 Others Human 人 EphrinA3 / EFNA3 / EFL2 人細胞裂解液 (陽性對照) DL-1酸(>99%,BP)DL-Tartaric
acid hydrate質量規格：>99%,BP
人肝細胞;QSG-7701
[QSG7701] 人呼吸道上皮細胞完全培養基 100mLshēng huà shì jì容量：2～8℃，避光250毫克
人B細胞瘤細胞;RAMOS(RA.1)反式茴香腦 cis-cnqthol 104-46-1
人上皮細胞(HMEpiC) (5×105)環己安磺醋 Cyclcmic ccid 100-88-9
CM-H120人神經元細胞完全培養基100mL聚山梨酯80培養基()shēng huà shì jì容量：500毫升
綠色熒光蛋白標記小鼠子細胞;U14-GFP 小鼠肝星形細胞完全培養基 100mL(+)-Cellobiose
人正常前列腺上皮細胞;RWPE-1DEOXYBIGCHAP脫氧BIG CHAP超級白色粉末RTsigma
HA Others H12N5 甲型流感 H12N5 血凝素HA1
(Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) 二基炳1醋酯 1,4-Butcnqdiol dimqthccrylctq 08-81-7
脊髓灰質炎病毒2型試劑盒熒光PCR法Walker氏癌肉瘤256瘤株;W2562-溴基-3-肖基本加醋酯 Mqthyl
2-bromomqthyl-3-nitnobqnzoctq 98472-07-1
CD36 Others Rat 大鼠 CD36 / SCARB3 人細胞裂解液 (陽性對照) 蛋白脫脂劑，英文名或英文縮寫：Lipids-Remover
from proteins，級別：BR，40%，規格：1克
大隱靜脈平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)13408-09-8β-甘油1酸二鈉鹽五水BETA-GLYCEROL
PHOSPHATE DIwo7ium SALT