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小雙節RNA病毒試劑盒熒光PCR法

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  • 產品名稱:小雙節RNA病毒試劑盒熒光PCR法
  • 產品型號:XG-R63421
  • 產品展商:西格
  • 產品文檔:無相關文檔
簡單介紹

小雙節RNA病毒試劑盒熒光PCR法保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

產品描述

產品特點: 本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測個位拷貝數的基因
特異性高:有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高:復孔間差異小,實驗結果重復性強
擴增性能優:擴增效率高,熒光信號強

產品名稱

小雙節RNA病毒試劑盒熒光PCR

規格

50T

貨號

XG-R63421

儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內**的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix (2mM)             
4 μl     引物1(10pM)                 
2 μl     引物2(10pM)                 
2 μl     Taq酶 (2U/μl)               
1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾高壓。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
WISH細胞,人羊膜細胞 普通變形桿菌 中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO DUX B11 Carrying pBSCRLc/pTCSgpt clone 35.6(>98%,BR)質量規格:>98%,BROxalyldihydrazide

CXCL9 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CXCL9 / MIG / C-X-C motif chemokine 9 蛋白惡唑(>96%,BC)質量規格:>96%,BCOxazole

NCI-H292(人肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H5N1 (A/bar-headed goose/Qinghai/1A/2005) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) 乙酸鈀質量規格:BCPalladium (II) acetate

小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-D2氯化鈀質量規格:BCPalladium (II) chloride

ALOX15B Others Human ALOX15B / 15 Lipoxygenase 2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 鄰苯二甲腈(>99.0%(GC))質量規格:>99.0%(GC)Phthalonitrile
hFOB 1.19(SV40
轉染人成骨細胞) 5×106cells/瓶×2 產氣腸桿菌D-色氨酸D-Tryptophan質量規格:>98%,BR

膀胱上皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105(1ml)D-半乳糖胺鹽酸鹽D(+)-Galactosamine 質量規格:BR,98%

TSPAN8 Others Human TSPAN8 / Teaspanin 8 / TM4SF3 人細胞裂解液 (陽性對照) 薯蕷皂苷;重樓皂苷III(標準品)Dioscin質量規格:HPLC98.0%,標準品

人成骨肉瘤細胞;Saos-2薯蕷皂甙Dioscin質量規格:BR,含量≥95.0%

AD293細胞,人胚腎細胞 牛胚氣管細胞,EB(NBL-4)細胞 CL-0303PATU8988(人胰腺癌細胞)5×106cells/瓶×2薯蕷皂素(標準品)Diosgenin質量規格:HPLC>98.0%,標準品
EPCAM Others Human
EpCAM / OP1 人細胞裂解液 (陽性對照) Antipaindixy7nochloride抗痛素100克生物技術級,600u/mg

人肝內膽管上皮細胞總RNAHIBEpiC NA啊匹油脂 L cPIqZON GRqcSq L 1678-0-3

PAK3 Others Human PAK3 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) Sulforhodaminep磺酰羅丹明B細胞培養試劑染料100毫克BS

中國倉鼠卵巢細胞;TPO-CHO-IBOVINESERUMALBUMIN,20%SOLUTION牛血清白蛋白溶液生物技術級500MLCOLD

SMC-1細胞,胸膜細胞瘤 早幼粒急性白血病細胞系,HL-60細胞 小鼠子細胞;U14(化瓊脂)
786-0
人腎透明細胞腺癌細胞PEPTONE140蛋白胨 140學級淺棕色到棕色粉末RTsigma

Hep G2人肝癌細胞 Hep G2 human hepatocarcinoma cells DMEM+10% FBS溴柏里酚藍;溴麝香草酚藍;溴柏里香酚藍;3,3-二溴麝香草酚磺酞 BroMothyMol bluq 76-29-2

PDGFC Protein Mouse 重組小鼠 PDGF-C / SCDGF 蛋白 (Fc 標簽)聚酮 Polyvinylpyrrolidone 10 (PVP10) 9003-39-8 25G 染色劑

人支氣管上皮細胞(HBEpiC)(5×105 ) 細胞名稱 種屬β-caroteneβ-葉紅素250毫克IND

豹貓肺成纖維樣細胞;LCL44648-54-8疊氮化基硅烷 (TMSiA)Azidotrimetxylsilane
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
小雙節RNA病毒試劑盒熒光PCR設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。

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