腹瀉類8種病毒試劑盒熒光PCR法

PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優：擴增效率高，熒光信號強

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

中國倉鼠肺細胞;R 1610 [R1610]司坦唑醇質量規格：>94%,BRStanozolol

ULBP2 Others Human 人 ULBP2 / N2DL-2 人細胞裂解液 (陽性對照) 司坦唑醇（標準品）質量規格：含量測定Stanozolol

KG-1 人髓性紅白血病細胞苯妥英鈉（標準品）質量規格：含量測定Phenytoin

HeLa 229人細胞 HeLa 229 human cervical cancer cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS辛可尼?。藴势罚┵|量規格：供檢查用Cinchonidine

HGF Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 HGF / Hepatocyte Growth Factor 蛋白水楊酸-4-辛基苯酯(>95.0%(GC))質量規格：>95.0%(GC)4-Octylphenyl Salicylate
HIC(人小腸癌細胞) 5×106cells/瓶×2膽酸Cholic acid質量規格：≥98%,BR，無水

ACE2 Others Human 人 ACE2 / ACEH 人細胞裂解液 (陽性對照) 膽酸(標準品)Cholic acid質量規格：HPLC≥98%，標準品

人口腔角質細胞HOK黨參炔苷（標準品）Lobetyolin質量規格：僅供鑒別用

HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/England/195/2009) HA 人細胞裂解液 (陽性對照) α-倒捻子素(標準品)α-mangostin質量規格：HPLC≥98%,標準品

KMB17 人胚肺成纖維細胞地奧司明(標準品)Diosimin質量規格：HPLC≥98%，標準品
C57BL/6小鼠脂肪間質干細胞 C57BL/6 mouse adipose mesenchymal stem cells二氧化銅，英文名或英文縮寫：Cupric oxide，級別：AR，99%，規格：500克

BE(2)C細胞，人神經母細胞瘤細胞 乙型溶血性鏈球菌 人胚肝二倍體細胞;CCC-HEL-1叔丁氧羰酰丁二 N-(tert-Butoxycarbonyloxy)succinimide,... 13139-12-3 5G 通用試劑

Sp2/0-Ag14(小鼠骨髓瘤細胞) 5×106cells/瓶×2乳醋 litxium LcCTcTq 867-22-0

HEp-2(人喉表皮樣癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0450SW 982(人滑膜肉瘤細胞)5×106cells/瓶×2 人上皮細胞;MCF-10AFerron高鐵試劑250克3.5N

人慢性髓系白血病細胞;K562本;大;;甲氧基本;甲基本基Anisole;metxoxybenzene
CDH2 Others Mouse 小鼠 N-Cadherin / CD325 / CDH2 人細胞裂解液 (陽性對照) POPSO,FREEACIDPOPSO生物技術級25G68189-43-5RT

人腦瘤細胞;SF763藍色葡聚糖 2000 BLUq DqXTRcN FOR GqL FILTRcTION 87912-38-6

FL62891細胞，人肝細胞 小鼠腹水瘤細胞,SAC-II C3細胞 長尾綠猴腎細胞;4647Azithromycin阿齊霉素100毫克14400～116000,液體,7條帶

Molt-4(人急性母細胞白血病細胞) 5×106cells/瓶×2TRITONX-102曲拉通 X-102試劑級100ML9002-93-1RT

Promocell C-23120 Fibroblast Growth Medium 2KIT, 成纖維細胞生長培養基2型套裝 500ml(n-辛基-b-D-硫代毗喃葡萄糖苷)
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
腹瀉類8種病毒試劑盒熒光PCR法三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。