海鷗彎曲菌試劑盒熒光PCR法

產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優：擴增效率高，熒光信號強

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
Tsu-Prl細胞，非雄依賴型前列腺癌 小鼠胚胎成纖維細胞,3T6-Swiss albino細胞 人前列腺上皮細胞HPEpiC亞麻酸甲酯(標準品)質量規格：分析標準品Methyl linolenate

HS 683(人腦膠質瘤細胞) 5×106cells/瓶×2十一酸甲酯(標準品)質量規格：分析標準品Methyl undecanoate

3T3-L1(小鼠胚胎成纖維細胞) 5×106cells/瓶×2 CM-H059人頸上皮細胞完全培養基100mL 人肝內膽管上皮細胞RNAHIBEpiC miRNA5 μg分子篩, 5 ?(pellets, 2.5-3.5 mm)質量規格：pellets, 2.5-3.5 mmMolecular sieves, 5 ?

CM-R079大鼠冠狀動脈平滑肌細胞完全培養基100mL高嶺土(CP)質量規格：CPKaolin

HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Hangzhou/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 超細高嶺土(325(44um))質量規格：325(44um)Kaolin(superfine)
Kasumi-1細胞，人急性成髓細胞白血病 615小鼠T細胞性白血病瘤株,L7912細胞 超氧化物歧化酶分析試劑盒SODFmoc-L-瓜氨酸Fmoc-L-Citrulline質量規格：>98%,BR

NCI-H524(人非小細胞肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2DL-丙氨酸DL-Alanine質量規格：>98.5%,BR

C6(大鼠膠質瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-00063T3-L1(小鼠胚胎成纖維細胞)5×106cells/瓶×2 小鼠胚胎成纖維細胞;3T3-Swiss albinoDL-酪氨酸DL-Tyrosine質量規格：0.98

牛腎細胞;MDBKDL-甲硫氨酸;蛋氨酸DL-Mine質量規格：>99%,BR

IFNGR1 Others Mouse 小鼠 IFNGR1 / CD119 人細胞裂解液 (陽性對照) DL-天冬氨酸DL-Aspartic acid質量規格：0.98
CCL6 Protein Mouse 重組小鼠 CCL6 / C-C motif ligand 6 蛋白 (His 標簽)司骨化醇質量規格：>98%,BRSecalciferol

Sf-9(昆蟲細胞) 5×106cells/瓶×2 人 Ierferon alpha-B / IFNA8 人細胞裂解液 (陽性對照) 25-羥甾醇質量規格：>98%,BR25-Hydroxyvitamin D2

蚊源細胞利拉魯肽質量規格：>95%,BRLiraglutide

FUT8 Others Hamster 倉鼠 FUT8 (aa 68-575) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) MK4827 (Niraparib)質量規格：>98%,BRMK-4827 (Niraparib)

原代滑膜皮細胞特制基礎培養基Many types of cells包裝：500/250/100醋氯芬酸（標準品）質量規格：UV法含量測定Aceclofenac
WST-1細胞活力和增殖檢測試劑盒WST紡錘菌素，英文名或英文縮寫：Netropsin dixy7nochloride，級別：BR，50u/mg，規格：100克

SERPINA6 Others Mouse 小鼠 SerpinA6 / CBG 人細胞裂解液 (陽性對照) 巴豆全(劇讀) CROTONcLDqHYDq

CHL 中國倉鼠肺細胞UREA尿素超級白色粉末RTsigma

CL-0054Calu-3(人肺腺癌細胞)5×106cells/瓶×2MOLWTMARKER,DNA,HIGHRANGE*DRYICEDNA Marker生物技術級150 gFrozen

大鼠骨髓間充質干細胞(BMSCs)(2-脫氧-D-葡萄糖)
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
海鷗彎曲菌試劑盒熒光PCR法將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。