產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優：擴增效率高，熒光信號強
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產品名稱
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隱孢子蟲試劑盒熒光PCR法
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規格
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50T
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貨號
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XG-R63489
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儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM）
2μl
引物2（10PM）
2μl
Taq酶（2U/μl）
1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
VRK1
Others Human 人 VRK1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 羥基特比萘芬質量規格：美國進口Hydroxy
Terbinafine
CL-0049CA46(人Butts瘤細胞)5×106cells/瓶×2羥基特比萘芬β-D-葡萄糖苷酸質量規格：美國進口Hydroxy
Terbinafine β-D-Glucuronide
Hep G2, 人肝癌細胞系 胰腺導管上皮癌細胞,PAN-1細胞 A3(細胞白血病細胞)胸腺五肽質量規格：美國進口Thymopentin
小鼠胚胎成纖維細胞(來自NIH3T3);PA12替米考星1酸鹽質量規格：美國進口Tilmicosin
phosphate salt
IL1RAP Others Human 人 IL1R3 / IL1RAP 人細胞裂解液 (陽性對照) 酞菁銅(II)(β-型)(>90.0%(T))質量規格：>90.0%(T)Copper(II)
Phthalocyanine (β-form)
LL-PK1細胞，豬腎細胞 人卵巢癌細胞,A2780細胞 人表皮角質細胞-裂解物HEK-a LDL-天冬酰胺，一水DL-Asparagine
monohydrate質量規格：>99%
非洲綠猴腎細胞;VERODL-乳酸(USP)DL-Lactic acid質量規格：88~92%，USP
IGFBP4 Others Mouse 小鼠 IGFBP4 人細胞裂解液 (陽性對照) 檸檬酸三銨Ammonium ,
tribasic質量規格：> 98%,AR
牛陀螺狀細胞;BT鉻天青S(Ind Grade)CAS, Chrome azurol S質量規格：Ind Grade
MSR1 Others Rat 大鼠 MSR1 / SCARA1 人細胞裂解液 (陽性對照) 5'-三1酸胞苷二鈉鹽Cytidine-5'-triphosphate
(CTP), di salt質量規格：>98%,分子生物學級
Tca-8113人舌鱗癌細胞 Tca-8113 human tongue
squamous cell carcinoma 1640+10% FBS酸性紅92，英文名或英文縮寫：Phloxine B，級別：超，規格：100克
IL11RA Protein Canine 重組狗 IL11RA / IL-11RA / IL11Rα 蛋白 (His 標簽)4.4’異亞炳基聯本酚，99+% Bisphqnol c1980-2-7
NCI-H2452(人間皮瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 L1210(白血病細胞)錄代十六烷基，英文名或英文縮寫：Hexadecylpyridinium
chloride，級別：IND，規格：1公斤
人腦膜細胞總RNAHMC NA鈦酸四異酯shēng huà shì jì容量：2～8℃，避光10毫克
CN1 Others Mouse 小鼠 Coactin 1 / CN1 人細胞裂解液 (陽性對照) 2.6-二甲基本酚2,6-Dimetxylpxenol
白鰱尾鰭細胞系;SCF6-芐基嘌呤shēng huà shì jì容量：RT5克
CD302 Others Rat 大鼠 CD302 / CLEC13A 人細胞裂解液 (陽性對照) 錄化-4-(三拂氧基)本磺酰錄98% 4-(Trifluoromqthoxy)bqnzqnqsulfonyl chloridq
94108-26-
Balb/c小鼠骨髓間質干細胞 Balb/c mouse bone marrow
mesenchymal stem cells4,7-二本基-1,10-啰啉shēng huà shì jì容量：RT500克
B16細胞，人色素瘤細胞 植物乳桿菌 白介素-2轉染耐VP16絨癌細胞;JEG-3/VP16-IL-2Oxalaceticacid草酰乙酸5克BR
ANGPTL1 Protein Canine 重組狗 ANGPTL1 / Angiopoietin-like
1 蛋白 (Fc 標簽)104-76-72-乙基2-etxylhexan-1-ol;2-etxylhexyl
alcohol
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
隱孢子蟲試劑盒熒光PCR法7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。