PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優：擴增效率高，熒光信號強
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產品名稱
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間日瘧原蟲試劑盒熒光PCR法
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規格
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50T
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貨號
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XG-R63525
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儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM）
2μl
引物2（10PM）
2μl
Taq酶（2U/μl）
1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
人成纖維細胞-RNAHEF-a miRNA5 μg乳酸鈣五水(>98%,USP)質量規格：>98%,USPCalcium
(L)-lactate, pentahydrate
Hela細胞，細胞 耐DDP肺癌細胞,A549/DDP細胞 H9c2大鼠心肌細胞(ATCC來源)2'-脫氧胸苷-5'-一1酸二鈉鹽質量規格：>97%,分子生物學級dTMP,
2'-Deoxythymidine-5'-monophosphate di salt
豚鼠心肌細胞;GP-H1衛茅醇(>99%，分子生物學級)質量規格：>99%，分子生物學級Dulcitol
CLMP Others Human 人 ASAM 人細胞裂解液 (陽性對照) 阿尼芬凈質量規格：>98%,BRAnidulafungin
CL-0419QSG-7701(人正常肝細胞)5×106cells/瓶×2安絲菌素P-3（束絲放線菌）質量規格：總含量>95% ,進分Ansamitocin P-3
NCI-H460 人大細胞肺癌細胞N,O-雙(硅基)乙酰胺(>75.0%(GC))N,O-Bis(trimethylsilyl)acetamide質量規格：>75.0%(GC)
COS-7L, 非洲綠猴腎成纖維細胞巴氯芬(標準品)Baclofen質量規格：HPLC>98%,標準品
人臍帶血單個核細胞巴洛沙星(標準品)Balofloxacin Dihydrate質量規格：> 98%,水合物標準品
人胚腎細胞;2V6.11 人胰腺上皮細胞完全培養基 100mL巴洛沙星Balofloxacin
Dihydrate質量規格：度> 98.5%,BR,二水合物
人肝細胞;HL-7702[L-02]鹽酸苯達莫司汀Bendamustine HCl質量規格：度> 98%
狗腎惡性組織細胞增生癥細胞;DH82 胚胎成纖維細胞，3T3-Swiss albino細胞 L6細胞，大鼠骨骼肌成肌細胞4-羥基氨苯蝶啶硫酸鈉鹽質量規格：美國進口4-Hydroxy
Triamterene Sulfate, Salt
人臍靜脈內皮細胞(人膀胱癌細胞污染);ECV-304 [ECV304;ECV
304]2,4-二氨基-6-苯基-7-蝶啶質量規格：美國進口2,4-Diamino-6-phenyl-7-pteridinol
HA Others H4N6 甲型流感 H4N6
(A/mallard/Ohio/657/2002) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) 外消旋拉呋替丁質量規格：美國進口rac Lafutidine
人羊膜間充質基質細胞HAMSC羅沙替丁質量規格：美國進口Roxatidine
MME Others Cynomolgus 食蟹猴 CD10 / Neprilysin / MME 人細胞裂解液 (陽性對照) 4-氯-4'-羥基二苯(>95.0%(GC))質量規格：>95.0%(GC)4-Chloro-4'-hydroxydiphenyl
Ether
SIRPA Others Human 人 SIRPA / CD172A 人細胞裂解液 (陽性對照)
CRESOLRED,wo7iumSALT紅鈉鹽分析級棕色結晶粉末RTsigma
肺成纖維細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)反式油酸 Methyl elaidate,≥99.0% 1937-62-8
1ML 通用試劑
GPR114 間日瘧原蟲試劑盒熒光PCR法Others Human 人 GPR114 人細胞裂解液 (陽性對照) N-(2-羌基)-N'-(2-磺醋)內鹽 HqPqS 7277-39-3
大鼠破骨細胞完全培養基 100mLOCBA鄰錄50毫升AR，98.5%
AZ-521人胃癌細胞 Human gasic cancer cells
AZ-521 MEM+10% FBS6211-24-1二本胺磺酸鋇DIpxenYLAMINE-4-SULFONIC
ACID BARIUM SALT