登革病毒2型試劑盒熒光PCR法

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優：擴增效率高，熒光信號強

PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。

檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

神經小膠質細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)2,2',7,7'-四溴-9,9'-螺二[9H-芴](>98.0%(T))質量規格：>98.0%(T)2,2',7,7'-Tetrabromo-9,9'-spirobi[9H-fluorene]

CHOdhfr細胞，二氫葉酸缺陷型中國倉鼠卵巢細胞 人癌細胞系,1590細胞 人星形膠質細胞裂解物HAL1,3,6,8-四溴芘(>98.0%(T))質量規格：>98.0%(T)1,3,6,8-Tetrabromopyrene

猴腎細胞;vero IgRCD4-2,2',7,7'-四溴-9,9-聯亞芴基(>98.0%(HPLC))質量規格：>98.0%(HPLC)2,2',7,7'-Tetrabromo-9,9'-bifluorenylidene

IL12A Others Human 人 IL12A / NKSF1 人細胞裂解液 (陽性對照) 酞菁銅(II)(α-型)(>90.0%(T))質量規格：>90.0%(T)Copper(II) Phthalocyanine (α-form)

豬腎細胞;LLC-PK1西紅花苷II（標準品）質量規格：HPLC≥98%，標準品Crocin II
PA319 人大腸癌細胞白鮮堿(標準品)Dictamnine質量規格：HPLC≥98%,標準品

CL-0466WI38/VA13(SV-40Z轉化肺成纖維細胞)5×106cells/瓶×2羅替戈汀Rotigotine質量規格：>95%,BR

小鼠神經干細胞(EGFP標記)鹽酸羅替戈汀Rotigotine 質量規格：>97%,BR

人細胞;1301 人腸動脈內皮細胞完全培養基 100mL右雷佐生鹽酸鹽;右丙亞胺鹽酸鹽Dexrazoxane HCl質量規格：>99%,BR

人肝星形細胞HHSteCSGI-1776SGI-1776；SGI1776質量規格：>98%,Pim1抑制劑
CD40LG Protein Human 重組人 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白 (Fc 標簽)淀粉酶測試盒shēng huà shì jì容量：1個

人臍帶動脈平滑肌細胞 (HUASMC)( 5×105 ) A-375 [A375], 人惡性素瘤細胞株 Human2，2’-二-4，4’-二羧醋(+4℃) 2,2'-BICINCHONINIC cCID 142-13-

人胚肺成纖維細胞;MRC-5品紅亞鈉培養基(濾膜法用)shēng huà shì jì容量：1米

KLRB1F Others Mouse 小鼠 KLRB1F / NKR-P1F 人細胞裂解液 (陽性對照) 本shēng huà shì jì容量：RT25克

HCT-8登革病毒2型試劑盒熒光PCR法 人回盲腸癌細胞110-87-23.4-二氫Dixy7nopyran
HAoSMC-c 人主動脈平滑肌細胞(HAoSMC) 500,000cells 胰島β細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)對硝基本-N-乙酰-β-D-基葡萄糖苷1克2～8℃，避光

肺大靜脈平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)抗氧劑 2,6-Di-tqrt-butyl-4-mqthylphqnol 18-37-0

CLCF1 Others Human 人 N1 / CLCF1 / CLC 人細胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸環沙星25克

人皮膚鱗癌細胞;A-431 [A431]三乙二醇100克

豚鼠皮膚細胞;GP-S2 恒河猴腎細胞，LLC-MK2細胞 WEHI-3細胞，小鼠血細胞108-75-82.4.6-基2,4,6-Collidine