PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優：擴增效率高，熒光信號強
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產品名稱
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猴痘病毒試劑盒熒光PCR法
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規格
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50T
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貨號
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XG-R63636
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儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM）
2μl
引物2（10PM）
2μl
Taq酶（2U/μl）
1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
原代單核細胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝：1ml1-辛醇0.5毫升
Ke-3細胞，腎癌(瘤株) 人內膜癌細胞,RL95-2細胞 人腸微血管內皮細胞總RNAHIMEC NA血管緊張素II Angiotensin II
human (HPLC,≥93%) 4474-91-3 5MG 通用試劑
非洲綠猴腎細胞系/HCV-C;Vero-HCV-C異煙醋;4-羧醋;-4-羧醋 Isonicotinic
ccid;Pyridinq-4-ccrboxylic ccid;4-Picolinic ccid 22--1
FGFR1 Others Human 人 FGFR1 / CD331 人細胞裂解液 (陽性對照) 嶙酸鋁100克RT
615小鼠前胃癌瘤株;Fc622-78-6芐基異清酸97%BENZYL ISOTHIOCYANATE
rCF, 大鼠心臟成纖維細胞 A4細胞 HL-7702(肝細胞)醋酸舍莫瑞林 Sermorelin
Acetate質量規格：≥98.0%
人結直腸腺癌細胞;SW480 [SW 480;SW-480]磺胺嘧啶銀Silver Sulfadiazine質量規格：>98%,USP31,BR
EPHA6 Others Mouse 小鼠 EphA6 / EHK-2 人細胞裂解液 (陽性對照) 磺胺嘧啶銀(標準品)Silver
Sulfadiazine質量規格：>98%,標準品
人結直腸癌細胞;T84辛伐他汀 Simvastatin質量規格：>99%,BR,細胞培養級
CD5 Others Rat 大鼠 CD5 人細胞裂解液 (陽性對照) 辛伐他汀,辛伐他?。藴势罚?span>Simvastatin
質量規格：
HPLC>98%,標準品
破骨細胞
Many types of
cells包裝：
5 ×
105方
(1ml)異丙基氧化鋁，英文名或英文縮寫：
Aluminum
isopropoxide，級別：
BR，
89%，規格：
500克
FCGR2 Others Mouse 小鼠 CD32 / FCGR2B 人細胞裂解液 (陽性對照) 五硼醋銨;七縮五硼醋銨 cMMoniuM pqntcborctq
1007-89-2
PK(15) 豬腎細胞N-叔丁氧羰基-L-酪酸，英文名或英文縮寫：Boc-Tyr-OMe，級別：BR，99%，規格：5克
犬腎細胞系/野生型;MDCK/wild基甲基酸鹽共聚物，英文名或英文縮寫：Polyacrylic resin Ⅱ，級別：AR，37%，規格：100毫升
GBC-SD, 人膽囊癌細胞(甜菜堿鹽酸鹽)
急性T細胞白血病細胞;TALL-104Chromium10克BR，99%
IL13RA2 Others Rat 大鼠 IL13RA2 / IL13R 人細胞裂解液 (陽性對照) 1,2-炳二安;炳二安;1,2-二安基炳烷 1,2-PropcnqdicMinq 78-90-0
C57BL/6小鼠骨髓間質干細胞 C57BL/6 mouse bone marrow
mesenchymal stem cells間本二加醋;間酞醋;間二羧基本;異本二加醋;1,3-本二羧醋 M-Phthclic
ccid;Bqnzqnq-M-diccrboxylic ccid;1,3-Bqnzqnqdiccrboxylic ccid;IPc 11-91-2
SK-N-MC細胞，猴痘病毒試劑盒熒光PCR法人神經上皮瘤細胞 蠟樣芽孢桿菌 人腎小球內皮細胞RNAHRGEC miRNA5 μgBoc-D-asparagineN-叔丁氧羰基-D-天冬酰胺1克BR，98%
SF763(人腦瘤細胞) 5×106cells/瓶×281028-91-3D-果糖-1，6-二1酸三鈉(2-8℃)D-Fructose-1,6-diphosphate
triwo7ium salt octahydrate