儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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產品名稱
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豬圓環病毒II型試劑盒熒光PCR法
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規格
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50T
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貨號
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XG-R63678
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產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優：擴增效率高，熒光信號強
PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM）
2μl
引物2（10PM）
2μl
Taq酶（2U/μl）
1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
TNFRSF10D Others Human 人 AILR4 / TNFRSF10D / DCR2 / CD264 人細胞裂解液 (陽性對照) 4-溴甲基-6,7-二甲氧基(>98.0%(HPLC))質量規格：>98.0%(HPLC)4-Bromomethyl-6,7-dimethoxycoumarin
CL-0247ZR-75-1(人癌細胞)5×106cells/瓶×2 DBD-CO-Hz
[=4-(N,N-二甲基氨基磺酰)-7-(N-肼基羰甲基-N-甲基)氨基-2,1,3-苯并惡二唑](>98.0%(HPLC))
NRG1 Others Human 人 NRG1-alpha (ECD) 人細胞裂解液 (陽性對照) 質量規格：>98.0%(HPLC)DBD-CO-Hz
[=4-(N,N-Dimethylaminosulfonyl)-7-(N-hydrazinocarbonylmethyl-N-methyl)amino-2,1,3-benzoxadiazole]
小鼠甲狀腺上皮細胞完全培養基 100mLNBD-CO-Hz [=4-(N-肼羰甲基-N-甲氨基)-7-硝基-2,1,3-苯并惡二唑](>95.0%(HPLC))質量規格：>95.0%(HPLC)NBD-CO-Hz
[=4-(N-Hydrazinocarbonylmethyl-N-methylamino)-7-nitro-2,1,3-benzoxadiazole]
Sf9昆蟲卵巢細胞 Sf9 insect ovarian cells GPM-115無血清無蛋白昆蟲細胞懸浮培養基(金普諾安 Cat#GPM001L01)BOC-硝基-L-精氨酸質量規格：>99%,BRBoc-Arg(NO2)-OH
SUNE-1細胞，低分化鼻咽癌細胞系 鼠色素瘤細胞系,B16-Fo細胞 CM-H031人食管上皮細胞完全培養基100mL多菌靈標準溶液(100μg/ml,u=3%)Carbendazim
solution質量規格：100μg/ml,u=3%
NR8383(大鼠肺泡巨噬細胞) 5×106cells/瓶×2Cbz-L-蘇氨酸芐酯N-Cbz-L-threonine
Benzyl Ester質量規格：0.98
Promocell C-26140 Placeal Epithelial CellGrowth Medium KIT, 胎盤上皮細胞生長培養基套裝 500ml(+)-2-甲基-L-絲氨酸(+)-2-Methyl-L-serine質量規格：0.99
腦微血管內皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)3,3-二苯基-L-丙氨酸3,3-Diphenyl-L-alanine質量規格：0.98
HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/Ohio/07/2009) 血凝素HA1
(Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) α-甲基-L-苯丙氨酸α-Methyl-L-phenylalanine質量規格：98%,BR,一水物
人食道平滑肌細胞cDNAHESMC cDNA9-去氧-9a-氮雜-同型紅霉素A 去甲阿奇霉素質量規格：美國進口9-Deoxo-9a-aza-9a-homo
Erythromycin A Desmethyl Azithromycin
COLEC10 Others Cynomolgus 食蟹猴 COLEC10 人細胞裂解液 (陽性對照) 阿奇霉素質量規格：美國進口Azithromycin
小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-B1阿奇霉素-d3質量規格：美國進口Azithromycin-d3
小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-B2 胰蛋白酶-EDTA(含100mL酶解緩沖液) 10mLΔ6,7-巴卡丁 III質量規格：美國進口Δ6,7-Baccatin III
MDA-MB-231(ATCC來源), 人癌細胞 Human(R)-奧美拉唑鈉鹽質量規格：美國進口(R)-Omeprazole Salt
tTA基因修飾的小鼠胰腺癌細胞(B類);Pan02-CAG-tTA-2D1磺酰酸鎳，英文名或英文縮寫：Nickel sulfamate，級別：高，98%，規格：1克
ERBB2 Others Mouse 小鼠 ErbB2 / HER2 / CD340 人細胞裂解液 (陽性對照) 2-基-5-肖基本加醋 2-Mqthyl-5-nitnobqnzoic ccid1972/2/6
豬圓環病毒II型試劑盒熒光PCR法LCC1 人癌細胞艾狄密新，英文名或英文縮寫：Erythromycin，級別：BR，10u/mg，規格：5克
HCC1937人癌細胞 Human breast cancer cell
line HCC1937 RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS十二酸鈉，英文名或英文縮寫：wo7ium dodecanoate，級別：超，99%，規格：1克
EPO Protein Mouse 重組小鼠 Erythropoietin / EPO 蛋白 (His 標簽)27565-41-9二硫代蘇糖醇1
4-DITHIO-DL-THREITOL(+4℃)