牛皰疹病毒1型試劑盒熒光PCR法

PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優：擴增效率高，熒光信號強

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

間充質干細胞脂肪細胞分化培養基MADM霜霉威(分析標準品,99%)質量規格：分析標準品,99%Propamocarb

NCI-H2170[H2170]細胞，人肺鱗狀細胞癌 人胚腎二倍體細胞,CCC-HEK-1細胞 人腦干星形膠質細胞HA-bs**喹(標準品)質量規格：分析標準品Cloquintocet-mexyl

小鼠髖動脈內皮細胞;PIEC降鈣素；醋酸鮭魚降鈣素質量規格：>95%,BRSalcitonin Acetate(Salmon Calcitonin)

PDGFRA Others Human 人 PDGFRa / CD140a 人細胞裂解液 (陽性對照) 塞卡替尼質量規格：≥98.50%;Src抑制劑Saracatinib(AZD0530)

CM-M023小鼠管內皮細胞完全培養基100mL塞克硝唑質量規格：>99%,BRSecnidazole
T84細胞，人結腸癌細胞 人色素瘤細胞,NW38細胞 EB病毒轉化的人B細胞;KMY0919L-天門冬氨酸1-甲酯L-Aspartic acid 1-methyl ester質量規格：>98%,BR

HCC1937(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2L-天冬氨酸-β-甲酯鹽酸鹽L-Aspartic acid β-methyl ester 質量規格：0.98

ARSA Others Mouse 小鼠 ARSA 人細胞裂解液 (陽性對照) S-甲基-L-半胱氨酸S-Methyl-L-cysteine質量規格：98%，進口分包

人Burkkit瘤細胞;DaudiS-三苯甲基-L-半胱氨酸S-Trityl-L-cysteine質量規格：>98%

CTNNB1 Others Mouse 小鼠 beta-Catenin / CTNNB1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) L-谷氨酸1-甲酯L-Glutamic Acid 1-Methyl Ester質量規格：0.97
HPAEC細胞，人肺動脈內皮細胞 猴腎細胞系,BSC-1細胞 CL-0082F9(小鼠畸胎瘤細胞)5×106cells/瓶×2木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷質量規格：HPLC≥95%，標準品Luteolin 7-O-glucuronide

SW626(人卵巢癌細胞) 5×106cells/瓶×2STA-9090;STA9090質量規格：>98%,HSP90抑制劑Ganetespib

HAoEC-c 人主動脈內皮細胞(HAoEC) 500,000cells 腦成纖維細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)赤芝酸D質量規格：HPLC≥97%Lucidenic acid D

腎動脈平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)DAPT (GSI-IX)質量規格：>98%,γ-secretase抑制劑DAPT (GSI-IX)

MUC1 Others Human 人 Mucin-1 / MUC-1 人細胞裂解液 (陽性對照) XAV-939;NVP-XAV 939質量規格：>98%XAV939
大鼠癌細胞;MADB106T4RNALigaseT4 RNA連接酶25克BR

CARTPT Others Human 人 CART / CARTPT 人細胞裂解液 (陽性對照) 錄代正炳烷 1-Chloropropcnq 240-24-2

CL-0021ACHN(人腎癌細胞)5×106cells/瓶×2KORSER氏枸櫞酸鹽肉湯shēng huà shì jì容量：RT5米

HEC-1-B細胞，人膜腺癌細胞 人脈絡叢上皮細胞,HCPEpiC細胞 大鼠雪旺細胞;RSC96Silicone本基甲基硅油III25克ACS，99%

BT-474(人導管癌細胞) 5×106cells/瓶×24-錄本;對錄本4-Chlorobenzoic acid;Chlorodracylic acid
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
牛皰疹病毒1型試劑盒熒光PCR法三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。