口蹄疫病毒A血清型試劑盒熒光PCR法

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優：擴增效率高，熒光信號強

PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。

檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

豚鼠肺細胞;GP-F1氟他胺（標準品）質量規格：HPLC>98%,標準品Flutamide

CA14 Others Human 人 CA14 人細胞裂解液 (陽性對照) 環1酰胺質量規格：>98%,一水合物USP,BRCyclophosphamide

CL-0443SK-N-MC(人神經上皮瘤細胞)5×106cells/瓶×2環1酰胺（標準品）質量規格：HPLC>99%,標準品Cyclophosphamide

NLGN1 Others Mouse 小鼠 Neuroligin 1 / NLGN1 人細胞裂解液 (陽性對照) 質量規格：>98%,ARAmidopyrine/aminopyrine

大鼠角膜內皮細胞完全培養基 100mL血管緊張素II質量規格：>98.0%,BRAngiotensin II
TM4(正常小鼠Sertoli細胞) 5×106cells/瓶×2貝美格（標準品）3-ETHYL-3-METHYLGLUTARIMIDE質量規格：含量測定

Hs 746T(人胃癌細胞) 5×106cells/瓶×2 COS-7L, 非洲綠猴腎成纖維細胞 腺病毒轉化的人胚腎細胞;AAV-293地喹氯銨（標準品）Dequalinium chloride質量規格：含量測定

人干細胞因子單克隆抗體細胞株;AMS2(SCF3)硫酸氫小檗堿（標準品）BERBERINE ACID SULFATE質量規格：含量測定

CD6 Others Rat 大鼠 CD6 / TP120 人細胞裂解液 (陽性對照) 度米芬（標準品）Domiphen bromide質量規格：HPLC法含量測定

CM-H026人內皮細胞完全培養基100mL醋酸優力司特；醋酸烏利司他Ulipristal acetate質量規格：>98%,BR
HCC827(人非小細胞肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0385MFC-GFP(小鼠前胃癌細胞(綠色熒光蛋白標記))5×106cells/瓶×2 非洲綠猴腎細胞;CV-12,9-二丁基-1,10-鄰二氮雜菲(>96.0%(HPLC))質量規格：>96.0%(HPLC)2,9-Dibutyl-1,10-phenanthroline

人胰腺癌細胞;AsPC-12,9-二苯基-1,10-菲咯啉(>98.0%(HPLC)(T))質量規格：>98.0%(HPLC)(T)2,9-Diphenyl-1,10-phenanthroline

ADAM15 Others Mouse 小鼠 ADAM15 / MDC15 人細胞裂解液 (陽性對照) 2,9-二氯-1,10-菲羅啉(>97.0%(GC)(T))質量規格：>97.0%(GC)(T)2,9-Dichloro-1,10-phenanthroline

MDA-MB-453 人癌細胞3,4,7,8-四甲基-1,10-菲羅啉(>98.0%(HPLC)(T))質量規格：>98.0%(HPLC)(T)3,4,7,8-Tetramethyl-1,10-phenanthroline

NCI-H1650人非小細胞肺癌細胞 NCI-H1650 cells in human non small cell lung cancer 1640+10%FBS5,5'-硫代雙水楊酸(>98.0%(GC)(T))質量規格：>98.0%(GC)(T)5,5'-Thiodisalicylic Acid
SERPINB12 Others Mouse 小鼠 SerpinB12 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) LACTOSEMONOHYDRATE乳糖單水合物美國國家**級,ACS級,英國藥典,歐洲藥典級,日本藥典級白色至米白色粉末RTsigma

人內膜腺癌細胞;HEC-1-B3-羌基聯本;間本基酚 3-xy7noxybiphqnyl;3-Phqnylphqnol;3-xy7noxydiphqnyl;M-xy7noxybiphqnyl 280-21-8

口蹄疫病毒A血清型試劑盒熒光PCR法SiHa細胞，子細胞 人鼻咽癌母系細胞,CNE-2Z細胞 CL-0240V79(倉鼠肺細胞)5×106cells/瓶×25MGPNPPSUBSTRATETAETSPNPP試劑級淺黃色COLDsigma

中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-HCV-p7CBZ-D-Valine芐氧羰基-D-纈酸10克BR，99%

FIGF Others Human 人 VEGF-D / VEGFD / FIGF 人細胞裂解液 (陽性對照) (L-蘇酸)