日本乙型腦炎病毒(JEV)試劑盒熒光-PCR法

PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優：擴增效率高，熒光信號強

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

人催產素受體(OX)試劑盒 Human OX ELISA Kit β-淀粉酶(70萬u/ml液體)  beta-Amylase  質量規格：BR,70萬u/ml液體

人催乳素(PRL)試劑盒 Human Prolactin/Leoopic Hormone,PRL/LTH ELISA Kit β-淀粉酶(酶活5萬粉末)  beta-Amylase  質量規格：BR,酶活5萬,粉末

人催乳素釋放(PRH)試劑盒 Human PRH ELISA Kit DNA酶,脫氧核糖核酸酶Ⅰ  Deoxyribonuclease  質量規格：≥2000KU/mg protein,(牛胰)

人催乳素抑制(PIH)試劑盒 Human PIH ELISA Kit 高峰淀粉酶來源于米曲霉(4000U/g)  Taka-Diastase from Aspergillus oryzae   質量規格：BR,4000u/g

人催乳素誘導蛋白(PIP)試劑盒 Human PIP ELISA Kit 高峰淀粉酶來源于米曲霉(100U/mg )  Taka-Diastase from Aspergillus oryzae   質量規格：BR,100 U/mg

人脆性組氨酸三聯體(FHIT)試劑盒 Human FHIT ELISA Kit 甘油醛-3-脫氫酶  Glyceraldehyde-3-phosphate Dehydrogenase  質量規格：BR,75U/MG

人存活素抗體/生存蛋白(Surv)試劑盒 Human ai-Survivin aibody,Surv ELISA Kit 菠蘿蛋白酶  Bromelain from pineapple stem   質量規格：>500U/MG,BR

人大腸癌專一抗原2(CCSA-2)試劑盒 Human colon cancer-specific aigen-2,CCSA-2 ELISA kit 輔羧酶;羧化輔酶;焦硫胺素  Thiamine pyrophosphate  質量規格：>98%,BR

人大腸癌專一抗原3(CCSA-3)試劑盒 Human colon cancer-specific aigen-3,CCSA-3 ELISA kit 吲哚乙酸酯  Indoxyl acetate  質量規格：0.97

人大腸癌專一抗原4(CCSA-4)試劑盒 Human colon cancer-specific aigen-4,CCSA-4 ELISA kit α-環糊精  α-Cyclodextrin  質量規格：>98%,BR
高峰淀粉酶來源于米曲霉(4000U/g)  Taka-Diastase from Aspergillus oryzae   質量規格：BR,4000u/g 人催乳素抑制(PIH)試劑盒 Human PIH ELISA Kit

高峰淀粉酶來源于米曲霉(100U/mg )  Taka-Diastase from Aspergillus oryzae   質量規格：BR,100 U/mg 人催乳素誘導蛋白(PIP)試劑盒 Human PIP ELISA Kit

甘油醛-3-脫氫酶  Glyceraldehyde-3-phosphate Dehydrogenase  質量規格：BR,75U/MG 人脆性組氨酸三聯體(FHIT)試劑盒 Human FHIT ELISA Kit

菠蘿蛋白酶  Bromelain from pineapple stem   質量規格：>500U/MG,BR 人存活素抗體/生存蛋白(Surv)試劑盒 Human ai-Survivin aibody,Surv ELISA Kit

輔羧酶;羧化輔酶;焦硫胺素  Thiamine pyrophosphate  質量規格：>98%,BR 人大腸癌專一抗原2(CCSA-2)試劑盒 Human colon cancer-specific aigen-2,CCSA-2 ELISA kit

吲哚乙酸酯  Indoxyl acetate  質量規格：0.97 人大腸癌專一抗原3(CCSA-3)試劑盒 Human colon cancer-specific aigen-3,CCSA-3 ELISA kit

α-環糊精  α-Cyclodextrin  質量規格：>98%,BR 人大腸癌專一抗原4(CCSA-4)試劑盒 Human colon cancer-specific aigen-4,CCSA-4 ELISA kit

黃嘌呤氧化酶(XOD)  Xanthine Oxidase from bovine milk  質量規格：BR，>7U/MG, powder 人大內皮素(Big ET-1)試劑盒 Human Big Endothelin,Big ET-1 ELISA Kit

?；?span>,L-氨基?；?span>  Acylase from Aspergilus sp.  質量規格：酶活力≥30000u/g 人大皰性類天皰瘡抗體(BP)試劑盒 Human Bullous Pemphigoid,BP ELISA Kit

胰蛋白酶1:250  Trypsin 1:250 fromPorcine pancreas  質量規格：>250U/mg,BR 人帶3蛋白(Band3)試劑盒 Human Band3 protein ELISA kit
H4-K4乙?；?span>100微克 胞苷；胞嘧啶核苷  Cytidine  質量規格：>99%,BR，可用于細胞培養

Mouseansforminggrowthfactorα,TGF-αELISA試劑盒小鼠轉化生長因子α(TGF-α)ELISA試劑盒規格：96T/48T 胞嘧啶核苷,胞苷(標準品)  Cytidine  質量規格：HPLC>98%,標準品

小鼠抗雙鏈DNA抗體(dsDNA)ELISA試劑盒 ，英文名： dsDNA ELISA Kit dATP,三脫氧腺苷鈉鹽  2'-Deoxyadenosine 5'-triphosphate di salt  質量規格：>98%,BR

大鼠胰島素受體β(ISR-β)ELISA檢測試劑盒RatInsulieceptorβ,ISR-βELISAKIT 96T/48T dGTP;三脫氧鳥苷鈉鹽  2'-Deoxyguanosine 5'-triphosphate tri salt   質量規格：>98%,BR

巨噬細胞移動抑制因子(MIF)ELISAKit規格：96T/48T

18444-66-1葫蘆素E廠家  Cucurbitacin E   英文名稱Ratlymphocytefunctionassociatedaigen-3ELISAKIT大鼠LFA-3(CD58)規格：96T/48T

18296-44-1纈草三酯說明書  valepotriate  英文名稱Ratlymphocytefunctionassociatedaigen-3ELISAKIT大鼠LFA-3(CD58)規格：96T/48T

182284-68-0山麥冬皂苷B規格  Liriopesides B   英文名稱RatLTC4ELISAKit大鼠白三烯C4(LTC4)規格：96T/48T
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
日本乙型腦炎病毒(JEV)試劑盒熒光-PCR法三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。