豬水皰病毒(SVDV)試劑盒熒光-PCR法

產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優：擴增效率高，熒光信號強

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
小鼠谷轉酶(ALT)ELISA試劑盒 ，英文名： ALT ELISA Kit 格列風內酯（標準品）  Griffonilide  質量規格：HPLC≥98%，標準品

小鼠骨保護素(OPG)ELISA檢測試劑盒MouseOsteoprotegerin,OPG 96T/48T 葛根素(標準品)  Puerarin  質量規格：HPLC≥98%，標準品

小鼠骨保護素(OPG)ELISA試劑盒 ，英文名： OPG ELISA Kit 葛根素  Puerarin  質量規格：HPLC≥98%，BR

小鼠骨保護素配體(OPGL)ELISA檢測試劑盒MouseOsteoprotegerinLigand,OPGL 96T/48T 根皮苷（標準品）  Phlorizin  質量規格：HPLC≥98%，標準品

小鼠骨保護素配體(OPGL)ELISA試劑盒 ，英文名： OPGL ELISA Kit 根皮苷  Phlorizin  質量規格：HPLC≥98%,BR

小鼠骨保素(OPG)ELISA試劑盒 ，英文名： OPG ELISA Kit 根皮素(標準品)  Phloretin  質量規格：HPLC≥98%，標準品

小鼠骨成型蛋白10(BMP10)ELISA試劑盒 ，英文名： BMP10 ELISA Kit 根皮素  Phloretin  質量規格：>97%,BR

小鼠骨成型蛋白15(BMP-15)ELISA試劑盒 ，英文名： BMP-15 ELISA Kit 鉤藤堿(標準品)  Rhyncholphylline  質量規格：HPLC≥98%，標準品

小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA檢測試劑盒MouseBonemorphogeneticprotein2,BMP-2 96T/48T β-谷甾醇  β-Sitosterol  質量規格：HPLC≥98%，標準品

小鼠骨成型蛋白2(BMP2)ELISA試劑盒 ，英文名： BMP2 ELISA Kit 光甘草定  Glabridin  質量規格：HPLC≥98%，標準品
根皮苷（標準品）  Phlorizin  質量規格：HPLC≥98%，標準品 小鼠骨保護素配體(OPGL)ELISA檢測試劑盒MouseOsteoprotegerinLigand,OPGLELISAKit 96T/48T

根皮苷  Phlorizin  質量規格：HPLC≥98%,BR 小鼠骨保護素配體(OPGL)ELISA試劑盒 ，英文名： OPGL ELISA Kit

根皮素(標準品)  Phloretin  質量規格：HPLC≥98%，標準品 小鼠骨保素(OPG)ELISA試劑盒 ，英文名： OPG ELISA Kit

根皮素  Phloretin  質量規格：>97%,BR 小鼠骨成型蛋白10(BMP10)ELISA試劑盒 ，英文名： BMP10 ELISA Kit

鉤藤堿(標準品)  Rhyncholphylline  質量規格：HPLC≥98%，標準品 小鼠骨成型蛋白15(BMP-15)ELISA試劑盒 ，英文名： BMP-15 ELISA Kit

β-谷甾醇  β-Sitosterol  質量規格：HPLC≥98%，標準品 小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA檢測試劑盒MouseBonemorphogeneticprotein2,BMP-2ELISAKit 96T/48T

光甘草定  Glabridin  質量規格：HPLC≥98%，標準品 小鼠骨成型蛋白2(BMP2)ELISA試劑盒 ，英文名： BMP2 ELISA Kit

鬼臼（標準品）  Podophyllotoxin  質量規格：HPLC≥98%，標準品 小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA試劑盒 ，英文大鼠肌紅蛋白(MYO/MB)ELISA檢測試劑盒RatMyoglobin,MYO/MBELISAKit 96T/48T β-半乳糖苷酶  β-Galactosidase  質量規格：700u/mg，羅氏分裝

人蛋白(肽酰脯氨酰順/反異構酶)NIMA結合1(PIN1)試劑盒 Human PIN1 ELISA Kit 脫落酸(標準品)  Abscisic acid,S-ABA  質量規格：98%,標準品

Ratplaceagrowthfactor,PLGFELISAKit大鼠胎盤生長因子(PLGF)ELISA試劑盒規格：96T/48T 脫落酸(高)  Abscisic acid,S-ABA  質量規格：98%,BR

GSK-3BETA蛋白共沉淀分析試劑盒5 脫落酸,S-誘抗素; 壯芽靈  Abscisic acid,S-ABA  質量規格：95%,BR

Mousethrombieceptor,ELISA試劑盒小鼠凝血酶受體()ELISA試劑盒規格：96T/48T 胃蛋白酶(1:3000)  PEPSIN  質量規格：1:3000,BR
28808-62-0梣酮品牌  Fraxinellone   英文名稱RatVitaminB6ELISAKit大鼠維生素B6(VB6)規格：96T/48T

28649-60-7環氧續隨子醇品牌  Epoxylathyrol    英文名稱RatVIII-AgELISAKit大鼠凝血因子VIII相關抗原(VIII-Ag)規格：96T/48T

28608-75-5葒草苷說明書  Orientin   英文名稱RatVIII-AgELISAKit大鼠凝血因子VIII相關抗原(VIII-Ag)規格：96T/48T

28543-07-9茶黃素-3＆#146;-沒食子酸酯說明書  Theaflavin-3＆#146;-Gallate  (TF-3＆#146;-G)   英文名稱RatVasoactiveIestinalPeptideELISAKit大鼠血管活性腸肽(VIP)規格：96T/48T

28282-25-9β-欖香酮酸品牌  β-EleMonic acid    英文名稱RatVasoactiveIestinalPeptideELISAKit大鼠血管活性腸肽(VIP)規格：96T/48T
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
豬水皰病毒(SVDV)試劑盒熒光-PCR法（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。