犬瘟熱病毒(CDV)試劑盒熒光-PCR法

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優：擴增效率高，熒光信號強

PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。

檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

人L苯氨酸解氨酶(PAL)ELISA檢測試劑盒HumanL-Phenylalanineammonla-lyase,PAL 96T/48T 抑霉唑標準溶液(100μg/ml,u=2%)  Imazalil solution  質量規格：100μg/ml,u=2%

人Na+/H+交換體3(NHE3)ELISA檢測試劑盒HumanNa+/H+exchanger3,NHE3 96T/48T 環草隆(標準品)  Siduron  質量規格：分析標準品

人NO犬瘟熱病毒(CDV)試劑盒熒光-PCR法D樣受體(NLR)ELISA檢測試劑盒HumanNOD-likereceptor9,NLR 96T/48T 西瑪津(標準品)  Simazine  質量規格：分析標準品

人N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA檢測試劑盒HumanN-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG 96T/48T 西瑪津標

丙草胺(分析標準品,97.5%)  Pretilachlor  質量規格：分析標準品,97.5% 人TH糖蛋白(THP)ELISA檢測試劑盒Huma-Hglycoprotein,THPELISAKit 96T/48T

丙草胺標準溶液(10μg/ml,u=2%)  Pretilachlor solution  質量規格：10μg/ml,u=2% 人T細胞急性母細胞白血病相關抗原(TALLA-1/CD231)ELISA檢測試劑盒Huma-cellacelymphoblasticleukemiaaigen,TALLA-1ELISAKit 96T/48T

殘殺威標準溶液(10μg/ml,u=4%)  Propoxur solution  質量規格：10μg/ml,u=4% 人T細胞受體(TCR)ELISA檢測試劑盒Humacellreceptor,TCRELISAKit 96T/48T
小鼠可溶性血管內皮生長因子受體1(sVEGF R1/sFlt1)ELISA試劑盒 ，英文名： sVEGF R1/sFlt1 ELISA Kit 3,3’-二沒食子酸酯茶黃素(分析標準品,≥98.0%(HPLC))  Theaflavin 3,3′-digallate  質量規格：分析標準品,≥98.0%(HPLC)

大鼠L苯氨酸解氨酶(PAL)ELISA檢測試劑盒RatL-Phenylalanineammonla-lyase,PALELISAKit 96T/48T 巴馬汀氯化物一水合物(分析標準品)  Palmatine chloride hydrate  質量規格：分析標準品

人的牛血清白蛋白(BSA)試劑盒 Human bovine serum albumin,BSA ELISA kit BSA[=N,O-雙(基硅基)乙酰胺](>75.0%(GC))  N,O-Bis(trimethylsilyl)acetamide  質量規格：>75.0%(GC)

Ratosteoclastdiffereiationfactor,ODFELISAKit大鼠破骨細胞分化因子(ODF)ELISA試劑盒規格：96T/48T "BSTFA[=N,O-雙(基硅基)三氟代乙酰胺](>95.0%(GC),用于氣相色譜)

  N,O-Bis(trimethylsilyl)trifluoroacetamide  質量規格：>95.0%(GC)"

FRUORESCAMINE蛋白質濃度熒光定量試劑盒100 TMS-咪唑(=N-基硅基咪唑)(>98.0%(T))  TMS-Imidazole (=N-Trimethylsilylimidazole)  質量規格：>98.0%(T)

Mousesmallnuclearribonucleoprotein,sNP/SmELISA試劑盒小鼠抗小核糖核蛋白/Sm抗體(sNP/Sm)ELISA試劑盒規格：96T/48T N,O-雙(硅基)乙酰胺(>75.0%(GC))  N,O-Bis(trimethylsilyl)acetamide  質量規格：>75.0%(GC)

小鼠可溶性細胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA試劑盒 ，英文名： sICAM-1 ELISA Kit N-甲基-N-硅基乙酰胺(>92.0%(GC))  N-Methyl-N-TMS-acetamide  質量規格：>92.0%(GC)

大鼠5核苷酸酶(5-)ELISA檢測試劑盒Rat5-Nucleotidase,5-ELISAKit 96T/48T N-基硅基咪唑(>98.0%(T))  N-Trimethylsilylimidazole  質量規格：>98.0%(T)

人蛋白質二硫鍵異構酶(PDI)試劑盒 Human protein disulfide isomerase,PDI ELISA Kit N-基硅基乙酰胺(>98.0%(GC))  N-Trimethylsilylacetamide  質量規格：>98.0%(GC)
人導管癌細胞;ZR-75-30 大鼠腦靜脈血管平滑肌細胞完全培養基 100mLHA腐植酸5克CP，98%

NFS-60 小鼠白血病細胞G-CSF依賴性2-肖基隊亞本基二安 1,4-Dicmino-2-nitnobqnzqnq 2307-14-

VTN Others Mouse 小鼠 Vionectin / VTN 人細胞裂解液 (陽性對照) 3-安基巴豆醋酯 Mqthyl 3-cminocrotonctq 1402-39-1

非洲綠猴腎細胞系/HCV-NS4A;Vero-HCV-NS4A蛋白胨shēng huà shì jì容量：5克

SDC1 Others Rat 大鼠 Syndecan-1 / SDC1 / CD138 人細胞裂解液 (陽性對照) (酪蛋白)

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