PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優：擴增效率高，熒光信號強
儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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產品名稱
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海豚鏈球菌(StI)試劑盒熒光-PCR法
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規格
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50T
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貨號
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XG-R63958
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檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
TNFSF8 Others Human 人 CD30 Ligand / TNFSF8 人細胞裂解液 (陽性對照) 己二酸二異癸酯質量規格：Diisodecyl
Adipate
小鼠皮質神經元MN-c壬二酸雙(2-乙基己基)酯(>75.0%(GC))質量規格：>75.0%(GC)Bis(2-ethylhexyl)
Azelate
MSLN Others Human 人 MSLN / Mesothelin 人細胞裂解液 (陽性對照) 己二酸二異丙酯(>99.0%(GC))質量規格：>99.0%(GC)Diisopropyl
Adipate
大鼠胰腺上皮細胞完全培養基 100mL己二酸二丁酯(>99.0%(GC))質量規格：>99.0%(GC)Dibutyl
Adipate
BALL-1人B細胞急性白血病細胞 BALL-1 B acute
lymphoblastic leukemia cells 90%RPMI1640(內含2mM L-glutamine)+10%胎牛血清吉非羅齊1-O-β-葡萄糖苷酸質量規格：美國進口Gemfibrozil 1-O-β-Glucuronide
牛胚氣管細胞;EB (NBL-4)D-蘋果酸(>98%，BR)D-Malic acid質量規格：>98%，BR
FGFBP3 Others Human 人 FGFBP3 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) dGTP;三1酸脫氧鳥苷鈉鹽2'-Deoxyguanosine
5'-triphosphate tri salt 質量規格：>98%,BR
CL-0169NCI-N87(人胃癌細胞)5×106cells/瓶×2dCTP;三1酸脫氧胞苷鈉鹽2'-Deoxycytidine
5'-triphosphate di salt 質量規格：>98%,BR
Caco-2，人結直腸腺癌細胞 腺癌阿霉素耐藥株，MEF-7/Adr細胞 SiHa(子細胞)dTTP;2‘-脫氧胸苷-5’三1酸鈉鹽(dTTP)2'-deoxythymidine-5'-triphosphate
(dTTP),3 salt, dihydrate質量規格：>98%,BR
人癌細胞;MDA-MB-4682‘-脫氧尿苷2'-Deoxyuridine質量規格：>99%,BR
PTPN2 Others Mouse 小鼠 PTPN2 / TC-PTP
(aa 2-314) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) Anilinexy7nochloride阿尼林鹽0.25毫升CP
小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-C4本加醋芐酯 Bqnzyl Bqnzoctq;Bqnzyl
bqnzqnq ccrboxylctq;Bqnzyl phqnyl forMctq10-21-4
T-47D細胞，管癌細胞 人食管癌細胞,EC871214細胞 大鼠骨肉瘤細胞;UMR-106葡聚糖凝膠 Sephade...
Sephadex G-50 Coarse 9048-71-9 100G 分離試劑
小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-B11,4-二乙磺酸倍半鈉鹽，英文名或英文縮寫：PIPES sesquiwo7ium salt，級別：AR，規格：100克
CDH2 Others Human 人 Cadherin-2 / CD325 / CDH2 / NCAD 人細胞裂解液 (陽性對照) MaltExtractAgar
500g原裝 BD 211220/Oxoid
HMy2.CIR細胞，人B母細胞 人肝癌細胞,H7402細胞 CL-0200RWPE1(人前列腺上皮細胞)5×106cells/瓶×2D-GalactoseD-(+)-葡萄糖25UACS級，99%
中國倉鼠卵巢細胞K1(亞系克隆);CHO-K11.3-環己二同，98%
1,3-Cyclohqxcnqdionq 204-0-9
LDLR Others Mouse 小鼠 LDLR / LDL Receptor 人細胞裂解液 (陽性對照) 流醋亞工 MqRCUROUS
SULFcTq 7783-36-0
猴源細胞甘酰-甘酰-L-纈酸，英文名或英文縮寫：Gly-Gly-Val，級別：BR，98%，規格：1克
CD58 Others Cynomolgus 食蟹猴 LFA-3 / CD58 人細胞裂解液 (陽性對照) 13472-85-05-溴-2-甲氧基5-Bromo-2-metxoxypyridine
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM）
2μl
引物2（10PM）
2μl
Taq酶（2U/μl）
1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
海豚鏈球菌(StI)試劑盒熒光-PCR法三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。