致病性大腸桿菌(EPEC)試劑盒熒光-PCR法

PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優：擴增效率高，熒光信號強

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

20874-52-6柴胡皂苷D廠家  Saikosaponin D   英文名稱RatPhosphoinositide-3kinaseELISAKit大鼠1脂酰肌醇三羥基激酶(PI3K)規格：96T/48T

2086-83-1小檗堿廠家  Berberine  英文名稱RatPhosphoinositide-3kinaseELISAKit大鼠1脂酰肌醇三羥基激酶(PI3K)規格：96T/48T

20831-76-9龍膽苦苷品牌  Gentiopicroside  英文名稱RatPGFElisakit大鼠前列腺素F型(PGF)規格：96T/48T

20784-50-3補骨脂乙素品牌  Isobavachalcone    英文名稱RatPGFElisakit大鼠前列腺素F型(PGF)規格：96T/48T

20736-09-8柴胡皂苷A規格  Saikosaponin A   英文名稱RatPGE1ELISAKit大鼠前列腺素E1(PGE1)規格：96T/48T
犬類胰蛋白酶試劑盒 Canine yptase ELISA Kit  65604-80-0麥冬皂苷D’規格  Ophiopogonin D’

英文名稱HumanAILR2(h)ELISAKIT人血小板**素(TPO)規格：96T/48T  74805-92-8麥冬甲基黃烷酮A廠家  Methylophiopogonanone A

化線粒體DNA萃取試劑盒20  15503-87-4光萼野百合堿說明書  Usaramine

RatinhibitorysubunitofNF-κBα,IKBαELISA試劑盒大鼠核因子κB抑制蛋白α(IKBα)ELISA試劑盒規格：96T/48T  156980-60-8羅漢果黃素品牌  Grosvenorine

小鼠早期生長應答因子1(EGR1)ELISA試劑盒 ，英文名： EGR1 ELISA Kit  88901-37-5羅漢果皂苷Ⅲe規格  mogroside Ⅲe
小鼠周期素依賴性激酶8(CDK8)ELISA試劑盒 ，英文名： CDK8 ELISA Kit  62-46-4硫辛酸說明書  Lipoic acid

犬維生素E(VE)ELISA檢測試劑盒CanineVitaminE,VEELISAKit 96T/48T  20831-76-9龍膽苦苷品牌  Gentiopicroside

犬透明質酸(HA)試劑盒 Canine Hyaluronic acid,HA ELISA Kit  153-18-4蘆丁規格  Rutin

英文名稱HumaumornecrosisfactorαELISAKIT人腫瘤壞死因子α(TNFα)ELISAKIT規格：96T/48T  481-72-1蘆薈大黃素廠家  Aloeemodin

超氧化物歧化酶(SOD)細胞裂解樣品制備試劑盒50  1415-73-2蘆薈苷說明書  Aloin
大鼠胰島β細胞瘤細胞;RIN-m5F酸性橙II，英文名或英文縮寫：Orange Ⅱ，級別：BR，99%，規格：25毫克

TEK Others Rat 大鼠 Tie2 / TEK 人細胞裂解液 (陽性對照) (R)-4-芐基-2-惡坐烷同 (R)-4-Bqnzyl-2-oxczolidinonq 1009-44-7

BGC-803 人胃癌細胞L-蘇糖醋鈣 L-Thrqonic ccid cclcium sclt 70723-61-6

97H-CMV-EGFP-puro(慢病毒構建穩定株)人肝癌細胞 97H-CMV-EGFP-puro (leiviral consuct stable sain) of human hepatocellular carcinoma cells DMEM+10% FBS+1%P/S+2ug/ml puromycinMALTEXTRACT麥牙提取物學級1KGCOLD

TGFB1 Protein Human 重組人 / 恒河猴 / 狗 TGF-beta 1 / TGFB1 蛋白17469-89-5N,N-二甲基-L-本酸 99%N,N-DImetxYL-L-pxenYLALANINE
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
致病性大腸桿菌(EPEC)試劑盒熒光-PCR法三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。