儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內**的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
產品名稱
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蠟樣芽孢桿菌(BC)試劑盒熒光-PCR法
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規格
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50T
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貨號
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XG-R64002
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產品特點: 本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測個位拷貝數的基因
特異性高:有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高:復孔間差異小,實驗結果重復性強
擴增性能優:擴增效率高,熒光信號強
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl)
1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾高壓。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
61825-98-7西貝母堿品牌 Sipeimine 轉基因棉花MON531品系試劑盒20
6155-35-7鼠李糖說明書 L-Rhamnose monohydrate 轉基因棉花MON15985品系試劑盒20
61371-55-9格列風內酯說明書 Griffonilide 轉基因棉花MON1445品系試劑盒20
61303-13-7異類葉升麻苷品牌 Isoacteoside 轉基因棉花GK19品系試劑盒20
61301-33-5五味子丙素品牌 schisandrin C 轉基因大豆GTS40.3.2品系試劑盒20
犬心肌特異性肌鈣蛋白T(c)試劑盒 Canine cardiac
isoform of opnin T,c ELISA Kit 509-15-9鉤吻堿規格 Gelsemine
蠟樣芽孢桿菌(BC)試劑盒熒光-PCR法英文名稱HumanmajorhistocompatibilitycomplexELISAKit人組織相容性復合物(MHC)規格:96T/48T 162857-65-0瓜子金皂苷V廠家 Polygalasaponin V
超強化學封閉溶液10毫升 遠志皂苷A說明書 Onjisaponin A
RatGlycatedhemoglobinA1c,A1cELISA試劑盒大鼠糖化血紅蛋白A1c(A1c)ELISA試劑盒規格:96T/48T 遠志皂苷B品牌 Onjisaponin B; Senegin III
小鼠轉化受體電位陽離子通道亞家族V成員1(PV1)ELISA試劑盒 ,英文名: PV1 ELISA Kit 62956-48-3戈米辛G規格 Gomisin G
超氧化物歧化酶(SOD)裂解樣品制備試劑盒50 528-58-5氯化矢車菊素規格 Cyanidin Chloride
Ratgrowthhormonereleasingpeptide-Ghrelin,GHRP-GhrelinELISA試劑盒大鼠生長釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA試劑盒規格:96T/48T 6681-18-1氯化木蘭花堿廠家 Magnoflorine chloride
小鼠腫廇蛋白P63(TP63)ELISA試劑盒 ,英文名: TP63 ELISA Kit 88901-36-4羅漢果皂苷V說明書 Mogroside Ⅴ
犬白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA檢測試劑盒CanineIerleukin-8,IL-8ELISAKit
96T/48T 10097-84-4羅通定品牌 Rotundine
犬髓過氧化物酶(MPO)試劑盒 Dog Myeloperoxidase,MPO
ELISA kit 100462-37-1絡塞定規格 Rosiridin
THP-1人單核白血病細胞 低分化結腸腺癌細胞,HCT-116細胞 SK-MES-1(肺鱗癌細胞)BRADFORDREAGENTBRADFORD試劑蛋白組學級透明藍色液體COLDsigma
小鼠源細胞1,3-二溴-5,5-二基內酰脲 1,3-Dibromo-5,5-dimqthylhydcntoin 77-48-2
HA Others H7N7 甲型流感 H7N7
(A/chicken/Netherlands/1/03) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) 紅色典化共(劇讀) MqRCURY(II)
IODIDq 7774-9-0
狗腎惡性組織細胞增生癥細胞;DH822-脫氧-D-赤戊糖,英文名或英文縮寫:2-Deoxy-D-Ribose,級別:BR,90%,規格:500U
COL4A3 Others Rat 大鼠 COL4A3 人細胞裂解液 (陽性對照) 1077-28-7DL-硫辛酸;DL-α-硫辛酸;1,2-二硫戊環-3-戊酸;DL-6,8-二硫代辛酸;α-硫脂酸;二硫辛酸DL-Thioctic
acid;1,2-Dithio lane-3-valeric acid; 1,2-Dithiolane-3-pentanoic acid; DL-α-Lipoic acid; α-Lipoic acid;
5-(1,2-Dithiolan-3-yl)valeric acid; 5-[3-(1,2-Dithiolanyl)]pentanoic acid;δ-[3-(1,2-Dithiacyclopentyl)]pentanoic
acid; DL-6,8-Dithiooctanoic