PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產品特點: 本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測個位拷貝數的基因
特異性高:有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高:復孔間差異小,實驗結果重復性強
擴增性能優:擴增效率高,熒光信號強
產品名稱
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麻風桿菌(ML)試劑盒熒光-PCR法
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規格
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50T
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貨號
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XG-R64004
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儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內**的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl)
1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾高壓。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
6926-14-3乙酰哈巴苷說明書 8-O-Acetylharpagide 組蛋白H4-K8乙?;瘷z測試劑盒10/20等
6926-14-3乙酰哈巴苷品牌 Acetylharpagide 組蛋白H4-K5乙?;瘷z測試劑盒10/20等
69091-17-4β-乙酰氧基異戊酰阿卡寧規格 β-acetoxyisovalerylalkannin 組蛋白H4-K31(mono)甲基化檢測試劑盒10/20等
6902-91-6吉馬酮說明書 Germacrone 組蛋白H4-K20(mono/di/i)甲基化檢測試劑盒10/20等
6902-77-8京尼平廠家 Genipin 組蛋白H4-K16乙?;瘷z測試劑盒10/20等
犬血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)試劑盒 Dog von
Willebrand Factor,vWF ELISA Kit 97-53-0丁香酚規格 Eugenol
英文名稱FN纖維連結蛋白規格:96T/48T
530-57-4丁香酸廠家 Syringic acid
腸胃活檢螺旋桿菌(H.PYLORI)亞甲基藍(METHYLENEBLUE)染色試劑盒50 12777-70-7東北貫眾素說明書 Dryocrassin ABBA
Ratghcagons-likepepfide1,GLP-1ELISA試劑盒大鼠胰高血糖素樣肽1(Glp-1)ELISA試劑盒規格:96T/48T 531-44-2東莨菪苷品牌 Scopolin
麻風桿菌(ML)試劑盒熒光-PCR法小鼠轉運蛋白1(TNPO1)ELISA試劑盒 ,英文名: TNPO1 ELISA Kit 51-34-3東莨菪堿規格 Scopolamine
Very low density lipoprotein receptor (VLDLR)
ELISA Kit 人極低密度脂蛋白受體(VLDLR)ELISA試劑盒 93675-88-8連翹酯苷E說明書 Forsythoside E
guineapigLeukoieneB4,LT-B4ELISAKit 豚鼠白三烯B4(LTB4)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝 28282-25-9β-欖香酮酸品牌 β-EleMonic acid
CLIAKitforANG-IIELISAKit大鼠血管緊張素Ⅱ規格:48T/96T 173429-83-9補骨脂A規格 Ficusin A
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PorcineDexamethasone,DexELISAKit豬地塞米松(Dex)ELISA試劑盒規格:96T/48T 14259-47-3香蜂草苷說明書 DidyMin
人腎近端小管上皮細胞(HRPTEpiC) MM, 小鼠小膠質細胞 MouseL-脯酸芐酯鹽酸鹽,英文名或英文縮寫:H-Pro-OBzloHCl,級別:特,98.0%,規格:25克
二氫葉酸還原酶缺陷型中國倉鼠卵巢細胞;CHO/dhFr-二棕櫚酰鱗脂酰膽減 1,2-DIHqXcDqCcNOYL-RcC-GLYCqRO-3-PHOSPHOCHOLINq 797-68-4
HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/Beijing/22808/2009) 血凝素HA1
(Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) 醇安 MonoqthcnolcMinq;qthylolcMinq;2-cMinoqthcnol;β-cMinoqthyl
clcohol;ColcMinq 141-43-2
A498 腎癌對叔丁基鄰本二酚,英文名或英文縮寫:TBC,級別:BS,規格:500毫克
F98-RFP-puro(慢病毒構建穩定株)大鼠腦膠質瘤細胞 F98-RFP-puro
(leiviral consuct stable sain) of rat brain glioma cells DMEM+10%
FBS+1%P/S+2ug/ml puromycinD-葡萄糖-1-1酸二鈉鹽(-20℃) 98-99%NA