產品特點: 本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測個位拷貝數的基因
特異性高:有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高:復孔間差異小,實驗結果重復性強
擴增性能優:擴增效率高,熒光信號強
產品名稱
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產氣莢膜梭菌(CP)試劑盒熒光-PCR法
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規格
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50T
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貨號
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XG-R64038
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儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內**的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl)
1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾高壓。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
人結直腸腺癌細胞;COLO 320DM
[COLO320DM]達比加群Dabigatran質量規格:>98%,BR
CCDC47 Others Human 人 CCDC47 人細胞裂解液 (陽性對照) 瑞格列奈Repaglinide質量規格:>99%,BR
人肝動脈平滑肌細胞完全培養基 100mL瑞格列奈(標準品)Repaglinide質量規格:>99%,BR
P815細胞,小鼠肥大細胞癌細胞 V79-4(中國倉鼠肺細胞) 非洲綠猴腎細胞系/HCV-C;Vero-HCV-CD-阿拉伯糖D-(-)-Arabinose 質量規格:>98%,BR
CCL15 Protein Human 重組人 CCL15 / MIP-5 / MIP-1 delta 蛋白 (aa 46-113, His 標簽)D-阿拉伯糖(標準品)D-arabinose質量規格:HPLC≥98%,標準品
人導管瘤細胞;BT-4742,2'-二羥基偶氮苯(>98.0%(T))2,2'-Dihydroxyazobenzene質量規格:>98.0%(T)
PDPN Others Mouse 小鼠 Podoplanin / PDPN 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) S-乙酰半胱氨酸鹽酸S-Acetamidomethyl-L-cysteine 質量規格:>98%,BR
CM-R022大鼠甲狀腺上皮細胞完全培養基100mLO-叔丁基-L-蘇氨酸甲酯鹽酸鹽O-tert-Butyl-L-threonine
methyl ester 質量規格:0.98
Raw264.7, 小鼠單核巨噬細胞白血病細胞 牛腎細胞,MDBK細胞 Hs 578Bst(人成纖維細胞)L-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽L-Alanine
isopropyl ester 質量規格:>98%
小鼠腎集合管細胞(SV40轉化);M-1L-天冬酰胺甲酯鹽酸鹽Methyl L-asparaginate mono質量規格:0.98
人癌細胞;MDA-MB-468Flurprimidol2-甲基-1-嘧啶-5-基-1-(4-三扶甲氧基本基)丙-1-醇1KU高,98%
TF Others Human 人 ansferrin / TF 人細胞裂解液 (陽性對照) 1-溴-3-基-2-
3,3-Dimqthylcllyl bromidq 870-63-3
牛腦垂體提取物BPEEDACoHC11-乙基-(3-二甲基基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽100毫克高,99%
GAP43 Others Human 人 GAP43 / Neuromodulin 人細胞裂解液 (陽性對照) 羥基乙酸shēng huà shì jì容量:100毫克
CHL-Don 中國倉鼠肺成纖維樣細胞(-N,N-雙
53452-16-7王不留行黃酮苷說明書 Vaccarin 豬髓過氧化物酶(MPO)試劑盒 Pig
Myeloperoxidase,MPO ELISA kit
53452-16-7王不留行黃酮苷規格 Vaccarin 豬髓1脂堿性蛋白(MBP)試劑盒 Porcine MBP
ELISA Kit
531-75-9秦皮甲素說明書 Esculin 豬水通道蛋白4(AQP-4)試劑盒 Pig Aquaporin
4,AQP-4 ELISA Kit
531-44-2東莨菪苷品牌 Scopolin 豬水通道蛋白1(AQP-1)試劑盒 Pig Aquaporin
1,AQP-1 ELISA Kit
531-29-3松柏苷廠家 Coniferin 豬雙氫(DHT)試劑盒 Pig
Dihydrotestosterone,DHT ELISA Kit
產氣莢膜梭菌(CP)試劑盒熒光-PCR法檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL
N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。