單純皰疹病毒(HSV)試劑盒熒光-PCR法

PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優：擴增效率高，熒光信號強

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。

檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

人小腸粘膜上皮細胞完全培養基 100mL達托霉素Daptomycin質量規格：≥930μg/mg,BR,可用于細胞培養

P388細胞，小鼠白血病細胞 空腸彎曲桿菌 大額牛皮膚成纖維樣細胞;BOS-1達托霉素(標準品)Daptomycin質量規格：效價測定

CCL20 Protein Mouse 重組小鼠 CCL20 / MIP-3 alpha 蛋白 (His 標簽)鹽酸柔紅霉素Daunorubicin HCl質量規格：度大于97%含量84.0-102%,USP30

P815(小鼠肥大細胞瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 人 CD1B & B2M Heterodimer 人細胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸柔紅霉素(標準品)Daunorubicin HCl質量規格：HPLC≥98%,標準品

人結直腸腺癌細胞;HCT 116 [HCT116]鹽酸柔紅霉素(進口)Daunorubicin HCl質量規格：USP,進分sigmaD8809
人肺細胞;HLF-a2-芐基咪唑啉2-Benzylimidazoline質量規格：美國進口

GFRA1 Others Canine 狗 GFRA1 / GFR alpha-1 人細胞裂解液 (陽性對照) Amidopyrine/aminopyrine質量規格：>98%,AR

恒河猴腎細胞;MMK3血管緊張素IIAngiotensin II質量規格：>98.0%,BR

Ls-174-T細胞，人結腸癌細胞 人色素瘤細胞,SK23細胞 人細胞;Hela維生素 D3 ((膽骨化醇)Vitamin D3質量規格：>98.0%(HPLC)4000萬IU/g

HCCC-9810(人肝內膽管癌細胞) 5×106cells/瓶×2帕唑帕尼鹽酸鹽Pazopanib HCl質量規格：>99%,BR,可用于細胞培養
牛腎細胞;MDBKFerricxy7noxide有水氧化鐵1克2.7N，99.7%

GUCA1A Others Human 人 GCAP1 / GUCA1A 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 3,3-二氧基聯本安二言醋鹽 3,3'-Dimqthoxybqnzidinq dixy7nochloridq 032-40-0

腎系膜細胞Many types of cells包裝：5 ×105方(1ml)D-Tryptophanmetxylesterxy7nochlorideD-色酸鹽酸鹽5克BR，98%

團頭魴尾鰭細胞;WCF 人卵巢畸胎瘤細胞，PA-1細胞 SK-OV-3(卵巢癌細胞)(R)--Leucinol(R)-2-基-4-甲基-1-5克BR，98%

人皮膚色素瘤細胞;SK-MEL-169-93-2尿酸Urea;8-xy7noxyxanthine;2,6,8(1,3,9)-Purinetrione;7,9-Dixy7no-1H-purine-2,6,8-(3H)-trione
LUM Others Human 人 LUM / Lumican / LDC 人細胞裂解液 (陽性對照) AEBSFAEBSF超級500MG30827-99-7COLD

間充質干細胞培養基MSCM-sfN-叔丁氧羰基-甘安醋 BOC-Glycinq 4230-0-2

GST Others Schistosoma japonicum 日本血吸蟲 Glutathione S-ansferase / GST 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) Barbitonewo7ium-xy7nochloricacidBuffersolution鈉鹽酸緩沖液1公斤AR

單純皰疹病毒(HSV)試劑盒熒光-PCR法人胚腎二倍體細胞;HEK-2二本胺磺酸鋇shēng huà shì jì容量：2～8℃10毫升

EL4. IL-2細胞，瘤細胞 人結腸癌細胞,Loo細胞 CM-H037人結腸平滑肌細胞完全培養基100mL吡羅紅GSNA