PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優：擴增效率高，熒光信號強
|
產品名稱
|
登革熱病毒3型(DFV-III)試劑盒熒光-PCR法
|
|
規格
|
50T
|
|
貨號
|
XG-R64066
|
儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM）
2μl
引物2（10PM）
2μl
Taq酶（2U/μl）
1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
TMEM27 Others Human 人 TMEM27 人細胞裂解液 (陽性對照) 酸性綠 50 質量規格：BS,進口原裝Lissamine? Green B
軟骨細胞培養基CM酸性綠A質量規格：BS,>97%,進口分裝Acid Green A
C-33A細胞，人子細胞 兔主動脈平滑肌細胞,CCC-SMC-1細胞 人表皮角質細胞-胎兒HEK-f焦1酸鉀(>97%,BC)質量規格：>97%,BCPotassium
pyrophosphate, tetrabasic
HFSF(人胚胎眼鞏膜成纖維細胞) 5×106cells/瓶×2鎢酸鉀二水(>98%,BR)質量規格：>98%,BRPotassium
tungstate, dehydrate
hMoCD14+-PB single donorpre-screened Pellet 人類外周血CD14+單核細胞團塊單一來源，預選型 > 1 mio.cells 人脊髓星形膠質細胞RNAHA-sp miRNA5 μg硫酸奎寧水合物(>98%,BR)質量規格：>98%,BRQuinine
hemisulfate salt hydrate
人喉癌上皮細胞;Hep-2 大鼠食管平滑肌細胞完全培養基 100mL乙酰唑胺Acetazolamide質量規格：>99%
腦膜細胞培養基MenCM-prfBr-Mmc (=4-溴甲基-7-甲氧基)(>98.0%(T))Br-Mmc
(=4-Bromomethyl-7-methoxycoumarin)質量規格：>98.0%(T)
SCN3B Others Human 人 SCN3B 人細胞裂解液 (陽性對照) 3-溴甲基-7-甲氧基-1,4-苯并惡嗪-2-酮(>98.0%(T))3-Bromomethyl-7-methoxy-1,4-benzoxazin-2-one 質量規格：>98.0%(T)
大鼠肺大動脈內皮細胞完全培養基 100mL4-溴甲基-6,7-二甲氧基(>98.0%(HPLC))4-Bromomethyl-6,7-dimethoxycoumarin 質量規格：>98.0%(HPLC)
BLU-87 人膀胱移行細胞癌 BLU-87 human bladder
ansitional cell carcinoma RPMI1640 (內含2mM-glutamine)+10%胎牛血清 DBD-CO-Hz [=4-(N,N-二甲基氨基磺酰)-7-(N-肼基羰甲基-N-甲基)氨基-2,1,3-苯并惡二唑](>98.0%(HPLC))
雜交瘤(B類);Z51B3C10H12A12G2F7B5TES；Tris乙磺酸,2-[（三（羥甲基）甲基）氨基]-1-乙磺酸質量規格：>99%,ARTES
中國倉鼠卵巢細胞系;CHO-TGF-beta-3/2000 Carrying Psv2-beta-TGF 肥大細胞瘤細胞，P815細胞 INS-1細胞，大鼠胰島素細胞3-[ (N-三(羥甲基)甲氨基]-2-羥基丙磺酸鈉質量規格：>98%,BRTAPSO
mono
293來源病毒包裝細胞;ΦA-GPTAPSO；3-[ (N-三(羥甲基)甲氨基]-2-羥基丙磺酸質量規格：>99%,BRTAPSO
STIM1 Others Human 人 STIM1 / GOK 人細胞裂解液 (陽性對照) N-三(羥甲基)甲基-3-氨基丙磺酸鈉質量規格：>99%,BRTAPS Salt
神經元細胞Many types of cells包裝：5 ×105方(1ml)S-I-G-S-L-A-K質量規格：>95%,BRS-I-G-S-L-A-K
88206-46-6羌活醇說明書 Notopterol 組織半胱氨酸蛋白酶-5(CASPASE-5)活性熒光定量檢測試劑盒20
88182-33-6歐當歸內酯A規格 Levistilide A 組織半胱氨酸蛋白酶-4(CASPASE-4)活性熒光定量檢測試劑盒20
88182-33-6歐當歸內酯A規格 Levistilide A 組織半胱氨酸蛋白酶-2(CASPASE-2)活性比色法定量檢測試劑盒20
88105-29-7三七皂苷Fe說明書 Notoginsenoside Fe 組織半胱氨酸蛋白酶-13(CASPASE-13)活性熒光定量檢測試劑盒20
登革熱病毒3型(DFV-III)試劑盒熒光-PCR法87-99-0木糖醇廠家 Xylitol 組織半胱氨酸蛋白酶-13(CASPASE-13)活性比色法定量檢測試劑盒20