新疆出血熱病毒(XHFV)試劑盒熒光-PCR法

PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優：擴增效率高，熒光信號強

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

小鼠外周血白細胞完全培養基 100mL二茂鐵乙酸(>97.0%(GC))質量規格：>97.0%(GC)Ferroceneacetic Acid

MFC小鼠胃癌細胞 MFC mouse gasic cancer cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS(肼基羰基)二茂鐵(>95.0%(HPLC)(T),用于高效液相色譜標記)質量規格：>95.0%(HPLC)(T),用于高效液相色譜標記(Hydrazinocarbonyl)ferrocene

IL36RN Protein Human 重組人 IL1F5 / IL36RN 蛋白二甲亞砜(>99.0%(GC))質量規格：>99.0%(GC)Dimethyl Sulfoxide

QG-56(人肺扁平上皮癌細胞) 5×106cells/瓶×2 L-02(正常肝細胞)1,2,3,4-四氫萘(>98.0%(GC)質量規格：>98.0%(GC)1,2,3,4-Tetrahydronaphthalene

CL-0220STO(小鼠胚成纖維細胞)5×106cells/瓶×27-羥基-3-羧酸(>98.0%(HPLC))質量規格：>98.0%(HPLC)7-Hydroxycoumarin-3-carboxylic Acid
人間充質干細胞-肝臟裂解物HMSC-hp L超細高嶺土(6000(3.5um))Kaolin(superfine)質量規格：6000(3.5um)

AXR2 Others Mouse 小鼠 AXR2 / CMG2 人細胞裂解液 (陽性對照) 高嶺土(醫藥級)Kaolin質量規格：醫藥級

正常小鼠Leydig細胞;TM3硅藻土G(TLC)Kieselguhr G質量規格：TLC

小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-D2 III型膠原酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL硅膠(AR)Silica gel質量規格：AR

EC109，人食管癌細胞 Human二氧化硅(99.99%,1-3mm)Silicon dioxide質量規格：99.99%,1-3mm
NCI-H23細胞，人非小細胞肺癌細胞 小鼠成纖維細胞,3T3NIH細胞 CM-R087大鼠軟骨細胞完全培養基100mL5-扶乳清酸shēng huà shì jì容量：500毫克

RKO(人結腸腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2水解酪蛋柏瓊脂; M-H瓊脂 Ccsqin xy7nolysctq cgcr; Muqllqr-Hinton cgcr;

Gibco 17005042 Keratinocyte-SFM (1X), Liquid(10724-011和37000015) 500ml尿嘧啶 Uracil (≥99%, cell culture tested) 66-22-8 25G 核酸衍生物

人腎系膜細胞cDNAHRMC cDNA2′-脫氧胞苷-5′-單嶙酸shēng huà shì jì容量：RT25克

CXCL16 Others Rat 大鼠 CXCL16 / SR-PSOX 人細胞裂解液 (陽性對照) Foline-pxenol 50ml/100ml/250ml Sigma F9252
6989-21-5蒼術酮廠家  Atractylon   組蛋白脫乙?；?span>1(HDAC1)活性比色法定量檢測試劑盒20

69884-00-0擬人參皂苷F11廠家  Pseudoginsenoside F11  組蛋白脫乙?；?span>(HDAC)總活性比色法定量檢測試劑盒20

69659-80-9丹參酮IIA-磺酸鈉品牌  Tanshinone IIA-sulfonic    組蛋白染色質沉淀(CHIP)分析試劑盒10/20

69659-80-9丹參酮IIA-磺酸鈉規格  Sulfotanshinone  Injection   組蛋白賴氨酸特異性脫甲基酶1(LYSINESPECIFICDEMETHYLASE-1;LSD-1)活性熒光定量檢測試劑盒

69363-14-0五味子酚規格  Schisanhenol   組蛋白H4乙?；瘷z測試劑盒10/20等
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
新疆出血熱病毒(XHFV)試劑盒熒光-PCR法三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。

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