儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內**的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
產品名稱
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貓源性成分(Feline)試劑盒熒光-PCR法
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規格
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50T
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貨號
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XG-R64092
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產品特點: 本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測個位拷貝數的基因
特異性高:有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高:復孔間差異小,實驗結果重復性強
擴增性能優:擴增效率高,熒光信號強
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl)
1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾高壓。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
R型三七皂苷R2廠家 (R)Notoginsenoside
R2 組織離子(Na)濃度熒光定量檢測試劑盒20
989-51-5表沒食子兒茶素沒食子酸酯規格 EGCG 組織離子(Na)濃度化學比色法定量檢測試劑盒20
98665-22-6靈芝酸G品牌 Ganoderic acid G 組織科薩基病毒B(CoxsackievirusB)定性檢測試劑盒20
98474-78-3擬人參皂苷RT5說明書 Pseudoginsenoside RT5 組織巨噬細胞型抗酸酸性1酸酶(SACP)活性比色法定量檢測試劑盒20
98296-48-1靈芝酸C2規格 Ganoderic acid C2 組織精氨酸(arginine)含量化學比色法定量檢測試劑盒20
人抗補體1q抗體(ai-C1q-aibody)試劑盒 Human
ai-C1q-aibody ELISA Kit 3,5,6,7,8,3’,4’-七甲氧基黃酮規格 3,5,6,7,8,3’,4’-heptemthoxyflavone
RabbitTissuefactorpathwayinhibitor,TFPIELISAKit兔組織因子途徑抑制物(TFPI)ELISA試劑盒規格:96T/48T 873001-54-83,29-二苯甲?;闃侨嗜紡S家 3,29-Dibenzoyl Rarounitriol
載玻片細胞CREB蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20 3,6-二芥子?;崽钦f明書 3,6’-Disinapoyl sucrose
Humanβai-galactanproteinsIgGELISA試劑盒人β乳糖蛋白抗體IgGELISA試劑盒規格:96T/48T 117047-07-13’-甲氧基葛根素品牌 3’-MethoxyPuerarin
小鼠組織蛋白去乙?;?span>(HD)ELISA
試劑盒 ,英文名:
HD ELISA Kit 3-羥基巴戟醌規格
3-Hydroxy- morindone
RabbitVascuolarcelladhesionmolecule1,VCAM-1ELISAKit兔血管內皮細胞粘附分子
1(VCAM-1/CD106)ELISA試劑盒規格:
96T/48T 28649-60-7環氧續隨子醇品牌
Epoxylathyrol
載玻片細胞IGF蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20 6873-13-8黃柏堿規格 Phellodendrine
Humanβ-siteAPP-CleavingEnzyme1,1BACE1ELISA試劑盒人β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1(BACE1)ELISA試劑盒規格:96T/48T 751-03-1黃柏酮廠家 Obacunone
小鼠轉化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒 ,英文名: TGF-β1 ELISA Kit 40246-10-4黃豆黃苷說明書 Glycitin
小鼠糖原1酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA檢測試劑盒MouseGlycogenphosphorylaseBB,GP-BBELISAKit
96T/48T 40957-83-3黃豆黃素品牌 Glycitein
2182-14-1文多靈廠家 Vindoline 英文名稱Ratprogesterone(PROG)ELISAkit大鼠孕同(PROG)ELISAKit規格:96T/48T
貓源性成分(Feline)試劑盒熒光-PCR法2174-59-65-去甲川陳皮素說明書 5-Demethylnobiletin 英文名稱Ratprogesterone(PROG)ELISAkit大鼠孕同(PROG)ELISAKit規格:96T/48T
21637-25-2異槲皮苷廠家 Isoquercitrin 英文名稱RatPro-ANP(1-98)ELISAKit大鼠心肽Pro-ANP(1-98)規格:96T/48T
21339-55-9相思子堿規格 Abrine 英文名稱RatPro-ANP(1-98)ELISAKit大鼠心肽Pro-ANP(1-98)規格:96T/48T
212701-97-8噻嗪二酮廠家 Xanthiazone 英文名稱RatPRLELISAKit大鼠催乳素(PRL)規格:96T/48T