狐貍源性成分（Vulpes）試劑盒熒光-PCR法

PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優：擴增效率高，熒光信號強

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

兔眼Tenon's囊成纖維細胞;RYTF1,4-3,6-雙脫水甘露醇(>98%,BR)質量規格：>98%,BR1,4-3,6-Dianhydro-D-mannitol

TGFBR2 Others Human 人 TGFβR2 / TGFR2 人細胞裂解液 (陽性對照) 1,4-環己二酮(>98%,BR)質量規格：>98%,BR1,4-Cyclohexanedione

CL-0135L1210(小鼠白血病細胞)5×106cells/瓶×21,4-二氨基蒽醌(>90%,BS)質量規格：>90%,BS1,4-Diaminoanthraquinone

CD14 Others Human 人 CD14 人細胞裂解液 (陽性對照) 1,4-二羥基蒽醌(>96%,BR)質量規格：>96%,BR1,4-Dihydroxyanthraquinone

小鼠小腸血管內皮細胞完全培養基 100mL1,2-(standard for GC, ≥99.5% (GC))質量規格：standard for GC, ≥99.5% (GC)1,2-Propanediol
人脈絡膜血管細胞完全培養基 100mL保泰（標準品）phenylbutazone質量規格：HPLC>99%,標準品

CHL細胞，中國倉鼠肺細胞 NIH/3T3(胚胎成纖維細胞) 小鼠腎足細胞;Mouse podocyte保泰鈣phenylbutazone Calcium質量規格：>98%

CSF3 Protein Human 重組人 G-CSF / CSF3 蛋白 (Fc 標簽)保泰鈉phenylbutazone 質量規格：>98%

TSCCa(人舌鱗癌細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠肥大細胞瘤細胞;P815吡非尼酮，哌非尼酮Pirfenidone質量規格：>98.5%,BR,可用于細胞培養

人肝臟星形細胞裂解物HHSteCL吡非尼酮,哌非尼酮(標準品)Pirfenidone質量規格：HPLC>99%,標準品
P4HB Others Mouse 小鼠 P4HB / ERBA2L 人細胞裂解液 (陽性對照) γ-L-谷酰-β-奈酰胺100克

人絨毛膜滋養層細胞HVT正丁基硫代1酰三胺 N-(n-Butyl)-phoric triamide,97% 94317-64-3 5G 通用試劑

ALCAM Others Rat 大鼠 ALCAM / CD166 人細胞裂解液 (陽性對照) 鱗醋 litxium phosphctq 10377-2-3

大鼠腸粘膜上皮細胞完全培養基 100mL錄甲基樹脂25克RT

A-375人惡性色素瘤細胞 A-375 human maligna melanoma cells DMEM+10% FBSPH緩沖液NA
141433-60-5鹽酸小檗堿規格  Berberine   英文名稱Ratgp130ELISAKIT大鼠gp130規格：96T/48T

140670-84-4Levatin品牌  Levatin   英文名稱RatGlycoprotein96ELISAKit大鼠腫瘤排斥性抗原gp96(gp96)規格：96T/48T

1405-86-3甘草酸說明書  Glycyrrhizic acid   英文名稱RatGlycoprotein96ELISAKit大鼠排斥性抗原gp96(gp96)規格：96T/48T

140369-76-2異型南五味子丁素品牌  Heteroclitin D  英文名稱RatGlycogenphosphorylaseMMELISAKit大鼠糖原1酸化酶同工酶MM(GPMM)規格：96T/48T

140360-29-8灰氈毛忍冬皂苷甲說明書  Macranthoidin A   英文名稱RatGlycogenphosphorylaseMMELISAKit大鼠糖原1酸化酶同工酶MM(GPMM)規格：96T/48T
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
狐貍源性成分（Vulpes）試劑盒熒光-PCR法６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。