PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優：擴增效率高，熒光信號強
儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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產品名稱
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鯊魚源性成分（Shark）試劑盒熒光-PCR法
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規格
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50T
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貨號
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XG-R64098
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檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
小鼠小膠質細胞;BV2科羅索酸（標準品）質量規格：HPLC≥98%，標準品Corosolic Acid
PAH Others Human 人 PAH / PH (415 Asn/Asp) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 可可堿（標準品）質量規格：≥99%，標準品Theobromine
CM-R094大鼠胎兒表皮角質形成層細胞完全培養基100mL苦參堿(標準品)質量規格：HPLC≥98%，標準品Matrine
HEC-1A, 人內膜癌細胞系 肝細胞,BRL細胞 TE 115.T(人軟組織纖維瘤細胞)苦參堿質量規格：≥97%,BRMatrine
小鼠細胞白血病;L12101酸氫鉀(>98%,BC)質量規格：>98%,BCPotassium
hydrogen tartrate
人腦動脈血管平滑肌細胞完全培養基 100mL潮霉素B(羅氏原裝)Hygromycin B質量規格：羅氏原裝,濃度50mg/ml
COS-6細胞，非洲綠猴腎細胞 A375(人類惡性色素瘤) 中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);DUKXB11
carrying pDEF202-hTPO-P1芹菜苷; 芹黃苷Apiin 質量規格：HPLC≥98%，標準品
EFNA5 Protein Mouse 重組小鼠 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白 (Fc 標簽)(Fc 標簽)柯伊利素-7-O-葡萄糖苷,野決明苷Chrysoeriol
7-O-glucoside質量規格：HPLC≥97%，標準品
BC-021(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2 綠色熒光蛋白標記小鼠子細胞;U14-GFP山柰酚-3-O-蕓香糖苷(標準品)Kaempferol-3-O-rutinoside質量規格：HPLC≥98%，標準品
人間充質干細胞-肝臟總RNAHMSC-hp NA泮托拉唑鈉一水物Pantoprazole 質量規格：>98%,BR
小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-D32,4-二羥基嘧啶，英文名或英文縮寫：Uracil，級別：BR，規格：15KU
小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-B1 胰蛋白酶-EDTA(含10mL 酶解緩沖液) 1mL3-(錄磺酰)本加醋，97%
3-(Chlorosulfonyl)bqnzoic ccid 402-64-3
MCF-7(MCF7)(ATCC來源), 人癌細胞 HumanBLOCKINGAGENTSAMPLERPACK阻斷試劑包蛋白組學級COLDsigma
CHST15 Others Human 人 CHST15 / BRAG 人細胞裂解液 (陽性對照) 粘膠質，英文名或英文縮寫：Pectin，級別：試劑級，98%，規格：5克
人肺鱗癌細胞;NCI-H52036431-72-8茶香螺烷 ≥90% (GC)2,6,10,10-Tetrametxyl-1-oxaspiro[4.5]dec-6-ene
133-05-1細辛脂素廠家 Asarinin 英文名稱RatFSHELISAKit大鼠促卵泡素(FSH)規格：96T/48T
133-04-0細辛脂素廠家 Asarinin 英文名稱RatFSHELISAKit大鼠促卵泡素(FSH)規格：96T/48T
13241-33-3新橙皮苷說明書 Neohesperidin 英文名稱RatFSHELISAKit大鼠促卵泡生長(RatFSH)規格：96T/48T
13241-33-3新橙皮苷規格 Neohesperidin 英文名稱RatFSHELISAKit大鼠促卵泡生長(RatFSH)規格：96T/48T
13241-28-6大黃酚-8-O-葡萄糖苷品牌 Chrysophanol-8-O-β-D-glucopyranoside 英文名稱RatFree-TestoteroneELISAKit大鼠游離睪同(Free-Testoterone)規格：96T/48T
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM）
2μl
引物2（10PM）
2μl
Taq酶（2U/μl）
1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
鯊魚源性成分（Shark）試劑盒熒光-PCR法三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。