轉基因植物Bar基因試劑盒熒光-PCR法

PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優：擴增效率高，熒光信號強

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

人心臟成纖維細胞( HCF) ( 5×105 ) GC-1, 鼠精原細胞 Mouse二苯并-21-冠7-(>96.0%(GC))質量規格：>96.0%(GC)Dibenzo-21-crown 7-Ether

小鼠成纖維細胞;φ24'-甲酰苯并-15-冠-5-(>98.0%(GC))質量規格：>98.0%(GC)4'-Formylbenzo-15-crown 5-Ether

TNFRSF17 Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 TNFRSF17 / BCMA 人細胞裂解液 (陽性對照) 4'-甲酰苯并-18-冠-6-(>98.0%(GC))質量規格：>98.0%(GC)4'-Formylbenzo-18-crown 6-Ether

SHG-44人膠質瘤細胞 Human glioma cell line SHG-44 RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS4,7,13,21,24-六氧雜-1,10-二氮雜雙環[8,8,8]-二十六烷(>98.0%(GC)(T))質量規格：>98.0%(GC)(T)4,7,13,16,21,24-Hexaoxa-1,10-diazabicyclo[8.8.8]hexacosane

IMR-32細胞，人神經母細胞瘤細胞 黃桿菌屬 人腦血管平滑肌細胞RNAHBCSMC miRNA5 μg二-N-去乙基胺酮質量規格：美國進口Di-N-desethyl Amiodarone
人胎盤絨毛膜細胞完全培養基 100mLN-氧基奧氮平Olanzapine N-Oxide質量規格：美國進口

MA-891細胞，小鼠癌高轉移細胞 L929(成纖維細胞) 人葡萄膜色素細胞;UM氨曲南Aztreonam質量規格：> 95%,BR

CCL7 Protein Human 重組人 MCP-3 / CCL7 蛋白 (His 標簽)氨曲南（標準品）Aztreonam質量規格：HPLC>95%,標準品

RH-35(大鼠肝癌細胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H7N8 (A/mallard/Netherlands/33/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 巴卡丁 IIIBaccatin III質量規格：度> 98%,BR，可用于細胞培養

人肺轉化細胞;AE1201巴卡丁 III（標準品）Baccatin III質量規格：HPLC>98%,標準品
AGRP Others Mouse 小鼠 AGRP / AgRP 人細胞裂解液 (陽性對照) X-SA瓊脂培養基shēng huà shì jì容量：RT1把/包

MEG-01 人成巨核細胞白血病細胞偶氮錄膦mN;2-(4-錄-2-膦醋基本偶氮)-7-(3-肖基本偶氮)-1,8-二羌基-3,6-二磺醋 Chlorophosphonczo MN 77320-04-0

MSTO-211H人肺癌細胞株 Human lung cancer cell line MSTO-211H RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS (50%) Glutaraldehyde solution (Grade I, 50% ...  10ML 通用試劑

MIF Protein Human 重組人 MIF / GLIF 蛋白 (His 標簽)L-天門冬酸鉀shēng huà shì jì容量：RT25克

人胚肺成纖維細胞;WI-38 [WI38] 人支氣管成纖維細胞完全培養基 100mL(二硫代蘇糖醇)
260413-62-5女貞苷說明書  ligustroflavone   英文名稱RatTATELISAKit大鼠凝血酶-抗凝血酶復合物(TAT)規格：96T/48T

260413-62-5女貞苷說明書  Ligustroflavone   英文名稱Rattarate-resistaacidphosphataseorm5bELISAKit大鼠抗酸酸性1酸酶5b(ACP5b)規格：96T/48T

2586-96-1蓮心堿規格  Liensinine  英文名稱Rattarate-resistaacidphosphataseorm5bELISAKit大鼠抗酸酸性1酸酶5b(ACP5b)規格：96T/48T

256925-92-5升麻酮醇-3-O-α-L-拉伯糖苷說明書  Cimigenol-3-O-α-L-arabinoside   英文名稱RatT4ELISAKit大鼠甲狀腺素(T4)規格：96T/48T

25459-91-0去亞甲基小檗堿說明書  Demethyleneberberine   英文名稱RatT4ELISAKit大鼠甲狀腺素(T4)規格：96T/48T
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
轉基因植物Bar基因試劑盒熒光-PCR法６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。