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轉基因植物Cry1A(c)基因試劑盒熒光-PCR法

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  • 產品名稱:轉基因植物Cry1A(c)基因試劑盒熒光-PCR法
  • 產品型號:XG-R64114
  • 產品展商:西格
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簡單介紹

轉基因植物Cry1A(c)基因試劑盒熒光-PCR法保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

產品描述

儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內**的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

產品名稱

轉基因植物Cry1A(c)基因試劑盒熒光-PCR

規格

50T

貨號

XG-R64114

產品特點: 本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測個位拷貝數的基因
特異性高:有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高:復孔間差異小,實驗結果重復性強
擴增性能優:擴增效率高,熒光信號強

PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix (2mM)             
4 μl     引物1(10pM)                 
2 μl     引物2(10pM)                 
2 μl     Taq酶 (2U/μl)               
1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾高壓。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。

檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。

原代單核細胞特制基礎無血清培養基Many types of cells包裝:500/100ml去亞甲基小檗堿(標準品)質量規格:HPLC98%,標準品Demethyleneberberine

CREG1 Others Mouse 小鼠 CREG / CREG1 人細胞裂解液 (陽性對照) 喹乙醇;喹酰胺醇(標準品)質量規格:HPLC99%,標準品Olaquindox

EB病毒轉化的人B細胞;KM0501喹乙醇;喹酰胺醇質量規格:≥98%,BROlaquindox

GP2-293細胞,人胚腎上皮包裝細胞 大鼠腎小球系膜細胞EC(HBZY-1),HBZY-1細胞 CL-0336FC33(人胚胎腎細胞(Asp-2基因修飾))5×106cells/瓶×2路路通酸(標準品)質量規格:HPLC98%,標準品Liquidambaric acid

BC-020(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2女貞苷(標準品)質量規格:HPLC98%,標準品Ligustroflavone
人胎盤羊膜細胞完全培養基 100mL醋酸Hydrocortisone Acetate質量規格:>98.5%,BR

SAC-II B2細胞,小鼠腹水瘤細胞 BRL 3A(大鼠肝細胞) 人皮膚成纖維細胞;CCC-HSF-1醋酸(標準品)Hydrocortisone Acetate質量規格:HPLC>98%,標準品

CCL11 Protein Human 重組人 CCL11 蛋白 (His 標簽)鹽酸伊達比星IdarubicinHCl質量規格:含量960~1030μg/mg,USP30

RD(人惡性胚胎橫紋肌瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 Angiopoietin-2 / ANG2 / ANGPT2 人細胞裂解液 (陽性對照) 甲磺酸伊馬替尼Imatinib Mesylate質量規格:>99.0%,BR,可用于細胞培養

人結膜細胞裂解物HConFL甲磺酸伊馬替尼(標準品)Imatinib Mesylate質量規格:HPLC>98%,標準品
家貓肺細胞;FCA-L1Cefazolinwo7iumsalt頭孢拉定V1USP

HCCC-9810細胞,膽管細胞型肝癌細胞 人二倍體細胞系,HL細胞 小鼠肝癌細胞;Hepa 1-6 [Hepa1-6]三四胺六乙酸 TTHA,98.0% 869-52-3 1G 通用試劑

小鼠B細胞雜交瘤細胞;W6/32血紅蛋柏(,分末) HqMOGLOBIN 9047-09-0

RTN4R Others Mouse 小鼠 Nogo Receptor 人細胞裂解液 (陽性對照) X-GLUC5--4--3-吲哚-β-D-葡萄糖苷 (X-Gluc)超級白色結晶粉末FROZENsigma

人間充質干細胞-骨髓裂解物HMSC-bm L二本基二錄硅烷;二本基二錄化硅;二錄二本基硅烷Dipxenyldichlorosilane;Dichlorodipxenylsilane
印烏堿規格  Indiaconitine  組織纖維素酶(cellulase)活性熒光定量檢測試劑盒20

異連翹苷規格  Isoforsythiaside  組織纖維素酶(cellulase)活性比色法定量檢測試劑盒20

異苦參酮廠家  Isokurarinone    組織纖維二糖酶(cellobiase)活性比色法定量檢測試劑盒20

異橙黃酮規格  3,4 ,5,7,8-pentamethoxyflavone  組織纖維蛋白溶酶原激活劑抑制物(PAI)活性化學發光法定量檢測試劑盒20

氧代川南亭堿廠家    轉基因植物Cry1A(c)基因試劑盒熒光-PCR組織西尼羅病毒蛋白酶(WVVPROTEASE)活性熒光淬滅法定量檢測試劑盒20


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