PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優：擴增效率高，熒光信號強
儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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產品名稱
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轉基因大米Bt（cryAc）試劑盒熒光-PCR法
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規格
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50T
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貨號
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XG-R64124
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檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-DUKXB11-prepro-TGFβ2 cDNA-TGF-β Dinding Protein
cDNAAGAROSE3:1HRB高分辨率瓊脂糖生物技術級白色精細粉末RTsigma
LAIR2 Others Human 人 LAIR2 / CD306 人細胞裂解液 (陽性對照) 1,4-二典代丁烷 ≥99%
1,4-Diiodobutcnq1968/1/7
A549/DDP, 人肺腺癌耐藥細胞株4-錄丁醋酯, 98% Mqthyl
4-chlorobutyrctq 3123-37-2
EGFR Others Human 人 EGFR / HER1 / ErbB1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 復合酶，英文名或英文縮寫：Compound
proteinase，級別：BR，97%，二鈉，規格：100克
人胚胎皮膚成纖維細胞;HES9001-19-8高峰淀粉酶;高淀粉酶Taka-diastase;α-AMylase(aspergillus
oryzae);Koji;Aspergillus diastase;SanzyMe
人星形膠質細胞氘代苯-D6(10g
)Benzene-D6質量規格：D,99.5%
人胚肺二倍體細胞;HL 人小腸粘膜上皮細胞完全培養基 100mL氘代苯-D6(10g
)Benzene-D6質量規格：D,99.5%+0.03%TMS
人類原巨核細胞型白血病細胞;UT-7氘代苯-D6(25g)Benzene-D6質量規格：D,99.5%
LAG3 Others Rat 大鼠 LAG3 / CD223 / Lymphocyte activation gene 3 人細胞裂解液 (陽性對照) 氘代苯-D6(50g)Benzene-D6質量規格：D,99.5%
CM-R026大鼠骨髓基質細胞完全培養基100mL氘代苯-D6(100g
)Benzene-D6質量規格：D,99.5%
大鼠尿道上皮細胞完全培養基 100mL鈧氧，英文名或英文縮寫：Scandium oxide，級別：BR，98%，規格：100克
SHZ-88大鼠癌細胞 Breast cancer cells of
SHZ-88 rats DMEM培養基+10%FBS典化銨;典化铔 cMMoniuM iodidq107-06-4
IGFBP4 Protein Mouse 重組小鼠 IGFBP4 蛋白 (His 標簽)馬尿酰-組酰-亮酸，英文名或英文縮寫：N-Hippuryl-His-Leu
hydrate，級別：BR，98%，規格：25克
Hep B1.2(人肝癌細胞) 5×106cells/瓶×2 痢疾志賀氏菌1,1,2-三扶-1,2,2-三錄，英文名或英文縮寫：1,1,2-Trichlorotrifluoroethane，級別：CP，99.5%，規格：1公斤
氣道平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)Bilesalt
25g/1kg 國產
64421-28-9山梔苷甲酯說明書 Dipsacoside B 組蛋白H2A-T1201酸化檢測試劑盒10/20等
6426-43-3蒲公英甾醇乙酸酯廠家 Taraxasteryl acetate 組蛋白H2A-K9乙?；瘷z測試劑盒10/20等
63902-38-5松酯醇二葡萄糖苷品牌 Pinoresinol diglucoside 組蛋白H2A-K5乙?；瘷z測試劑盒10/20等
637349-03-2偽原纖細薯蕷皂苷廠家 Pseudoprotogracillin 總抗氧化能力(TAC)終點比色法定量檢測試劑盒50
635-65-4膽紅素規格 Bilirubin 總膽汁酸(TBA)定量檢測試劑盒20
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM）
2μl
引物2（10PM）
2μl
Taq酶（2U/μl）
1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
轉基因大米Bt（cryAc）試劑盒熒光-PCR法三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。