儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內**的試管,操作過(guò)程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
產(chǎn)品名稱(chēng)
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瘧原蟲(chóng)試劑盒PCR 熔解曲線(xiàn)法
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規格
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50T
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貨號
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XG-R63816
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產(chǎn)品特點(diǎn): 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測個(gè)位拷貝數的基因
特異性高:有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高:復孔間差異小,實(shí)驗結果重復性強
擴增性能優(yōu):擴增效率高,熒光信號強
PCR實(shí)驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
實(shí)驗過(guò)程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl)
1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設立一個(gè)專(zhuān)用的PCR實(shí)驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾高壓。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?,從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照),每個(gè)測試反應體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
104-54-1肉桂醇規格 Cinnamyl alcohol 英文名稱(chēng)RatCD40LELISAKit大鼠CD40L規格:96T/48T
104472-68-6香蒲新苷廠(chǎng)家 Typhaneoside 英文名稱(chēng)RatCD30ELISAKit大鼠CD30規格:96T/48T
104-46-1反式茴香腦說(shuō)明書(shū) cis-Anethol 英文名稱(chēng)RatCD26ELISAKit大鼠CD26規格:96T/48T
104-46-1反式茴香腦品牌 Anethole 英文名稱(chēng)RatCD23ELISAKit大鼠CD23規格:96T/48T
104112-82-5鹽酸黃柏堿廠(chǎng)家 Phellodendrine chloride 英文名稱(chēng)RatCD163ELISAKit大鼠CD163規格:96T/48T
兔子孕/孕酮(PROG)ELISA檢測試劑盒RabbitProgesterone,PROGELISAKit
96T/48T 545-47-1羽扇豆醇品牌 Lupeol
犬環(huán)1酸腺苷(cAMP)試劑盒 Canine cyclic adenosine
monophosphate,cAMP ELISA Kit 4547-24-4科羅索酸規格 Corosolic Acid
英文名稱(chēng)HumanPro-ANP(1-98)ELISAKit人心肽Pro-ANP(1-98)規格:96T/48T 6807-83-6三葉豆紫檀苷廠(chǎng)家 Trifolirhizin
化線(xiàn)粒體氧化應激活性氧(ROS)光澤精化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒50 548-83-4高良姜素說(shuō)明書(shū) Galangin
RatIerleukin10,IL-10ELISA試劑盒大鼠白介素10(IL-10)ELISA試劑盒規格:96T/48T 474-58-8胡蘿卜苷品牌 Daucosterol
載玻片細胞線(xiàn)粒體復合物II蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20 18797-79-0紫堇靈說(shuō)明書(shū) Corynoline
Mouseadiponectin,ADPELISA試劑盒小鼠脂聯(lián)素(ADP)ELISA試劑盒規格:96T/48T 紫萁酮品牌 Osmundacetone
小鼠早期生長(cháng)應答因子4(EGR4)ELISA試劑盒 ,英文名: EGR4 ELISA Kit 33069-62-4紫杉醇規格 Taxol
腦素/腦尿肽(BNP)ELISA檢測試劑盒Monkeybrainnaiureticpeptide,BNPELISAKit
96T/48T 10376-48-4紫菀酮廠(chǎng)家 Shionone
犬粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)試劑盒 Dog Granulocyte-Macrophage
Colony Stimulating Factor,GM-CSF ELISA Kit 480-10-4紫云英苷說(shuō)明書(shū) Astragalin
485-35-8金雀花堿規格 Cytisine 植物染色質(zhì)沉淀分析(CHIP)完全試劑盒(包括抗體)10
4852-22-6原廠(chǎng)家 proanthocyanidins 植物染色質(zhì)沉淀分析(CHIP)試劑盒10
484-29-7白鮮堿規格 Dictamnine 植物染色質(zhì)沉淀分析(CHIP)試劑盒10
484-20-8佛手柑內酯品牌 Bergapten;5-Methoxypsoralen 植物氫ATP酶(H+-ATPase)總活性比色法定量檢測試劑盒20
瘧原蟲(chóng)試劑盒PCR 熔解曲線(xiàn)法484-20-8佛手柑內酯廠(chǎng)家 5-Methoxypsoralen 植物羥賴(lài)氨酸(HYL)含量比色法定量檢測試劑盒20