產品特點: 本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測個位拷貝數的基因
特異性高:有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高:復孔間差異小,實驗結果重復性強
擴增性能優:擴增效率高,熒光信號強
產品名稱
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偽狂犬病毒(PRV-gB)定性試劑盒PCR法
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規格
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50T
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貨號
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XG-R64199
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儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內**的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl)
1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾高壓。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
93-35-67-羥基規格 Umbelliferone 組織甘油-3-1酸脫氫酶-2(Glycerol-3-PhosphateDehydrogenase-2)活性比色法定量檢測試劑盒20
928151-78-4通關藤苷F廠家 Tenacissoside F 組織甘油-3-1酸脫氫酶(Glycerol-3-PhosphateDehydrogenase)總活性比色法定量檢測試劑盒20
92-61-5東莨菪內酯廠家 Scopoletin 組織鈣離子濃度比色法定量檢測試劑盒20
916347-31-4斷血流皂苷A廠家 Clinodiside A 組織非蛋白/游離巰基含量比色法定量檢測試劑盒20
911819-08-4OphiopojaponinC廠家 Ophiopojaponin C 組織二(MDA)比色法定量檢測試劑盒50
小鼠凝血酶抗凝血酶復合物(TAT)ELISA檢測試劑盒Mousethrombin-aithrombincomplex,TATELISAKit
96T/48T 1135-24-6阿魏酸品牌 Ferulic acid
人抗氨酰NA合成酶,線粒體(AARS2)抗體試劑盒 Human ai alanyl-NA syhetase,mitochondrial(AARS2)aibody
ELISA kit 115909-22-3安格洛苷C規格 Angoroside C
rabbittissueinhibitorsofmetalloproteinase1,TIMP-1ELISAKit兔子基質金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒規格:96T/48T 107534-93-0安五脂素廠家 Anwuligan
載玻片細胞CYP2B1蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20 126-17-0澳洲茄胺說明書 Solasodine
HumanβLactoglobulin,β-LgELISA試劑盒人β乳球蛋白(β-Lg)ELISA試劑盒規格:96T/48T 20318-30-3澳洲茄邊堿品牌 Solamargine
RatAngiopoietin2,ANG-2ELISAKit大鼠血管**素2(ANG-2)ELISA試劑盒規格:96T/48T 74285-86-2雷酚內酯品牌 Triptophenolide
載玻片細胞線粒體復合物V蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20 16561-29-8伏波酯-12-十四烷酸酯-13-乙酸酯規格 12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetate
Mouseadrenomedullin,ADMELISA試劑盒小鼠腎上腺髓質素(ADM)ELISA試劑盒規格:96T/48T 75799-18-7PresapogeninCP4廠家 Presapogenin CP4
小鼠載脂蛋白E(APOE)ELISA試劑盒 ,英文名: APOE ELISA Kit 123350-57-25補充中2說明書 Hederagenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl
(1→2)-α-L-arabinopyranoside
猴腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA檢測試劑盒MonkeyTumornecrosisfactorα,TNF-αELISAKIT
96T/48T 60213-69-65補充中3品牌 Oleanolic acid-3-O-β-D-glucopyranosyl
(1→2)-α-L-arabinopyranoside
633-66-9硫酸小檗堿品牌 Berberine Sulfate 總L-高半胱氨酸(Hcy)定量檢測試劑盒50
63238-67-5苯甲酰新烏頭原堿品牌 Benzoylmesaconine 滋養細胞法胚胎干細胞繁殖試劑盒10
63238-66-4苯甲酰烏頭原堿說明書 Benzoylhypacoitine 轉基因玉米TC1507品系試劑盒20
63238-66-4苯甲酰烏頭原堿品牌 Benzoylhypacoitine 轉基因玉米T14品系試劑盒20
63223-86-9人參皂苷Rh1說明書 Ginsenoside Rh1 轉基因玉米MON863品系基因定性檢測試劑盒20
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。偽狂犬病毒(PRV-gB)定性試劑盒PCR法報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。