產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優：擴增效率高，熒光信號強
|
產品名稱
|
乙型腦炎病毒(JEV)定性試劑盒RT-PCR 法
|
|
規格
|
50T
|
|
貨號
|
XG-R64219
|
儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM）
2μl
引物2（10PM）
2μl
Taq酶（2U/μl）
1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
人海馬神經元 Human樟腦（標準品）質量規格：含量測定(-)-CAMPHOR
SLAMF6 Others Mouse 小鼠 SLAMF6 / Ly108 人細胞裂解液 (陽性對照) 11-羰基-β-乙酰乳香酸（標準品）質量規格：含量測定3-ACETYL-11-KETO-BETA-BOSWELLIC
ACID
小鼠肺腺癌細胞系;LA7953',4',5',5,7-五甲氧基黃酮（標準品）質量規格：含量測定3',4',5',5,7-PENTAMETHOXYFLAVONE
CRELD1 Others Human 人 CRELD1 人細胞裂解液 (陽性對照) 金橙II（標準品）質量規格：檢查OrangeΙΙ
SH-SY5Y人神經母細胞瘤細胞 SH-SY5Y human neuroblastoma
cells MEM/F-12(1:1)+10%FBS法莫替丁相關化合物B質量規格：美國進口Famotidine
Related Compound B
小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-B4N-乙酰-L-酪氨酸N-Acetyl-L-Tyrosine質量規格：0.98
Bel-7402細胞，人肝癌細胞 人胚纖維細胞系,HEF細胞 大鼠纖維母細胞;1/EJ 1-1N-乙酰-L-色氨酸乙酯Ac-Trp-Oet質量規格：HPLC>98%,BR
KU812(人外周血嗜堿性白血病細胞) 5×106cells/瓶×2N-乙酰-DL-色氨酸N-Acetyl-DL-tryptophan質量規格：0.98
Promocell C-28011 Mesenchymal Stem CellAdipogenic Differe.
Medium, 間充質干細胞成脂分化培養基(即用型) 100mlN-甲酰-DL-色氨酸Nalpha-Formyl-DL-tryptophan質量規格：0.98
人表皮角質細胞-總RNAHEK-a NAL-酪氨酸叔丁酯L-Tyrosine tert-butyl ester 質量規格：>98%,BR
人表皮色素細胞-中色素cDNAHEM-m cDNA4-基安替比林250毫克保存：-20℃
FGF21 Others Mouse 小鼠 FGF21 / Fibroblast Growth Factor 21 人細胞裂解液 (陽性對照) 酰炳同 ChroMiuM(III)
ccqtylccqtonctq 1679-31-
AAV-293 人胚腎細胞聚乙二醇 10000 Poly(ethylene glycol)
10,000 (PEG 10000) 25322-68-3 500G 通用試劑
CL-0214SK-N-SH(人神經母細胞瘤細胞)5×106cells/瓶×2LIM培養基1米RT
MA, 小鼠星形膠質細胞(D-葡萄糖-6-1酸二鈉)
轉錄因子AP-1 英文名稱： anscription Factors AP-1 規格： 48T/96T 英文縮寫： AP-1
n-Octylbenzene 中文名： 分子式：C14H22
轉錄因子 AP-1(AP-1) 作用： ELISA 規格： 48T/96T 進口分裝 Amprolium
137-88-2 中文名：鹽酸氨丙林 分子式：C14H20Cl2N4
轉甲狀腺素蛋白 英文名稱： Human ansthyretin 規格： 48T/96T 英文縮寫： T
Ritonavir 155213-67-5 中文名：利托那韋 分子式：C37H48N6O5S2 度：98.0%
轉基因植物TE基因核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T Ropivacaine 98717-15-8 中文名：鹽酸羅哌卡因 分子式：C17H27ClN2O
轉基因植物Sad1基因核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
Rosiglitazone maleate 中文名：馬來酸羅格列酮 分子式：C22H23N3O7S
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
乙型腦炎病毒(JEV)定性試劑盒RT-PCR 法PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。