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銅綠假單胞菌試劑盒PCR-熒光探針法

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  • 產品名稱:銅綠假單胞菌試劑盒PCR-熒光探針法
  • 產品型號:XG-R64411
  • 產品展商:西格
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簡單介紹

銅綠假單胞菌試劑盒PCR-熒光探針法保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

產品描述

產品特點: 本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測個位拷貝數的基因
特異性高:有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高:復孔間差異小,實驗結果重復性強
擴增性能優:擴增效率高,熒光信號強

產品名稱

銅綠假單胞菌試劑盒PCR-熒光探針法

規格

48T   0.1PCR

貨號

XG-R64411

儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內**的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix (2mM)             
4 μl     引物1(10pM)                 
2 μl     引物2(10pM)                 
2 μl     Taq酶 (2U/μl)               
1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾高壓。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
小鼠虹膜色素上皮細胞完全培養基 100mL達馬莫德質量規格:含量>98.5%,類白色粉末Doramapimod

L1210小鼠白血病細胞 L1210 mouse leukemia cells DMEM培養基+10%FBS鹽酸多佐胺;鹽酸杜塞酰胺質量規格:>99%,USP31Dorzolamide HCl

IL17A Protein Human 重組人 IL17 / IL17A 蛋白 (His 標簽)多球殼菌素;嗜熱菌殺酵母素(來源于無孢霉群)質量規格:≥98%,sigma分裝Myriocin from Mycelia sterilia

人膠質細胞(少突細胞)(HO) (1×106 ) 細胞名稱 種屬亞精胺鹽酸鹽質量規格:≥98%Spermidine tri

CM-H097人椎間盤髓核細胞完全培養基100mL栗精胺質量規格:>98%,進分Castanospermine
雜交瘤(B);Z1510C6D10F4G6 小鼠脈絡膜血管細胞完全培養基 100mL芐氟噻嗪BendrofluMethiazide質量規格:分析標準品,用于含量測定

HAVSMC, 人主動脈平滑肌細胞 Human蘭雪醌,白花丹醌,白花丹素(標準品)Plumbagin質量規格:HPLC98%,進口標準品

EFNA1 Others Mouse 小鼠 EFNA1 / Ephrin-A1 人細胞裂解液 (陽性對照) 黃鐘花醌;拉帕醇 (標準品)Lapachol 質量規格:>98%,進口標準品

人紅系白血病細胞;TF-1亮菌甲素Armillarisin A質量規格:TLC鑒別

人脂肪間充質干細胞(脂肪)(HMSC-ad)(5×105)17α-羥基1醇酮17α-Hydroxypregnenolone質量規格:>96%,美國進口
中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-beta2(414) CL.32 pTGF-beta2(414) 前列腺癌細胞,RM-1細胞 S37細胞,小鼠肉瘤細胞阿糖胞苷 5-1酸鹽質量規格:美國進口Cytarabine 5'-Monophosphate

SV-40轉化肺成纖維細胞;WI38/VA13達卡巴嗪-d6質量規格:美國進口Dacarbazine-d6

HPX Others Mouse 小鼠 HPX / Hemopexin 人細胞裂解液 (陽性對照) 達沙替尼β-D-葡萄糖苷質量規格:美國進口Dasatinib β-D-Glucuronide

上皮細胞cDNAHMEpiC cDNA達沙替尼羧酸質量規格:美國進口Dasatinib Carboxylic Acid

PVRL1 Others Rat 大鼠 CD111 / Nectin-1 / PVRL1 人細胞裂解液 (陽性對照) N-去甲基加蘭他敏質量規格:美國進口N-Desmethyl Galanthamine
豬白介素1α(IL-1α)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Tenacissoside F  928151-78-4  中文名:通關藤苷分子式:C35H56O12 

豬白介素1α(IL-1α)ELISAkit   ELISA.   96T/48T              Terbinafine  91161-71-6  中文名:特比萘芬  分子式:C21H25N 

豬白介素1elisa試劑盒   豬白介素1試劑盒   規格型號:96T/48T   豬白介素1試劑盒,規格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產品別名:豬白介素1試劑盒、豬白介素1 elisa試劑盒   保存條件:2-8   保質期:6個月。  Tazobactam acid  中文名:他唑巴坦酸  分子式:C10H12N4O5S 

豬白介素18(IL-18)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Tenacissoside H  中文名:通關藤苷分子式:C42H66O14 

豬白介素17(IL-17)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Tenacissoside I  中文名:通關藤苷分子式:C44H62O14  度:%
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1銅綠假單胞菌試劑盒PCR-熒光探針法循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。


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