蠟樣芽胞桿菌試劑盒恒溫熒光法

PCR實(shí)驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

產(chǎn)品特點(diǎn): 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個(gè)位拷貝數的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高：復孔間差異小，實(shí)驗結果重復性強
擴增性能優(yōu)：擴增效率高，熒光信號強

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過(guò)程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽(yáng)性對照)，每個(gè)測試反應體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應加入的量 N個(gè)反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個(gè)PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽(yáng)性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

大鼠胚胎心肌細胞;H9c2(2-1)蛋白激酶C（530-558）質(zhì)量規格：>95%,BRProtein Kinase C (530-558)

HCT 116細胞，結腸癌細胞 人肝癌細胞,Bel-7404細胞 CL-0016A549(人非小細胞肺癌細胞)5×106cells/瓶×2甲狀旁腺相關(guān)蛋白拼接同種型3（104-173），人質(zhì)量規格：>95%,BRpTH-Related Protein Splice Isoform 3 (140-173) (human)

二氫葉酸還原酶缺陷型中國倉鼠卵巢細胞;CHO/dhFr-甲狀旁腺（13-34），人質(zhì)量規格：>95%,BRpTH (13-34) (human)

CSF1R Others Human 人 M-CSFR 人細胞裂解液 (陽(yáng)性對照) 甲狀旁腺（3-34），牛質(zhì)量規格：>95%,BRpTH (3-34) (bovine)

小梁網(wǎng)細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)膽酸質(zhì)量規格：≥98%,BR，無(wú)水Cholic acid
中國倉鼠卵巢細胞;CHOUTP;5‘-三1酸尿苷三鈉UTP, Tri Salt質(zhì)量規格：>98%,BR

SCARB2 Others Human 人 SCARB2 / LIMP2 / CD36L2 人細胞裂解液 (陽(yáng)性對照) Fmoc-N'-甲基三苯甲基-L-賴(lài)氨酸Fmoc-Lys(Mtt)-OH質(zhì)量規格：0.98

氣管上皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)芴甲氧羰基-O-芐基-L-蘇氨酸Fmoc-Thr(Bzl)-OH質(zhì)量規格：0.98

IFNA1 Others Rat 大鼠 IFN-alpha / IFNA1 / IFN 人細胞裂解液 (陽(yáng)性對照) N'-Fmoc-L-賴(lài)氨酸Fmoc-Lys-OH質(zhì)量規格：>98%

大鼠尿道上皮細胞完全培養基 100mLFmoc-天門(mén)冬氨酸-β-芐酯Fmoc-L-aspartic acid β-benzyl ester質(zhì)量規格：>98%
RN-h, 大鼠海馬趾神經(jīng)元 Rattus瓊脂糖凝膠6FF1克2～8℃

EPHA7 Others Mouse 小鼠 EPHA7 / EHK-3 人細胞裂解液 (陽(yáng)性對照) 順-十輕-1-酚 CIS-DqCcxy7no-1-NcPHTHOL 99 36129-47-4

人B細胞瘤細胞;RAMOS1,2,3,4-環(huán)丁四羧二酐 Cyclobutcnq-1,2,3,4-tqtrcccrboxylic dicnhydridq 4412-87-6

GREM1 Others Mouse 小鼠 Gremlin 1 / GREM1 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細胞裂解液 (陽(yáng)性對照) 麥芽浸膏湯shēng huà shì jì容量：100克

CL-0445Sp2/0-Ag14(小鼠骨髓瘤細胞)5×106cells/瓶×2ConcanavalinA 25mg/100mg Amresco分裝
中文名稱(chēng)   方法   規格              Clopidogrel bisulfate  中文名：硫酸氫氯吡格雷  分子式：C16H18ClNO6S2 

中文名稱(chēng)   方法   規格              5-O-Ethylcleroindicin D  中文名：  分子式：C10H16O4 

致病性大腸桿菌(EPEC)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針?lè )?span>)   48T  Topiramate  中文名：托吡酯  分子式：C12H21NO8S  度：98.0%

質(zhì)粒中量提取試劑盒   Plasmid Exaction Kit  Torososide A  165689-32-7  中文名：  分子式：C38H32O15  度：%  關(guān)鍵詞：  植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

質(zhì)粒中量提取試劑盒   50T  trans-4-Aminocyclohexanol  27489-62-9  中文名：  分子式：C6H13NO  度：98.0%  關(guān)鍵詞：
實(shí)驗過(guò)程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長(cháng)期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設立一個(gè)專(zhuān)用的PCR實(shí)驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jì)Υ?，從而確保實(shí)驗與實(shí)驗之間的連續性。
蠟樣芽胞桿菌試劑盒恒溫熒光法６．試劑或樣品準備過(guò)程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。

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