儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內**的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
產品名稱
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嗜肺軍團菌試劑盒恒溫熒光法
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規格
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48T
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貨號
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XG-R64445
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產品特點: 本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測個位拷貝數的基因
特異性高:有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高:復孔間差異小,實驗結果重復性強
擴增性能優:擴增效率高,熒光信號強
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl)
1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾高壓。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
人肝竇內皮細胞 (HHSEC) ( 5×105 )四己基化銨(>98.0%(T))質量規格:>98.0%(T)Tetrahexylammonium
Iodide
CL-0067COLO 320(人結腸癌細胞)5×106cells/瓶×2四戊基化銨(>98.0%(T))質量規格:>98.0%(T)Tetraamylammonium
Iodide
小鼠胚胎成纖維細胞;NIH/3T3 大鼠牙細胞完全培養基 100mL四庚基化銨(>98.0%(T))質量規格:>98.0%(T)Tetraheptylammonium
Iodide
LOVO/Adr 結腸癌阿霉素耐藥株四苯基化膦(>97.0%(T))質量規格:>97.0%(T)Tetraphenylphosphonium
Iodide
EML1 Others Human 人 EML1 / TLT-1 人細胞裂解液 (陽性對照) 四苯硼鈉質量規格:AR
tetraphenylboron
中國倉鼠卵巢細胞K1(亞系克隆);CHO-K1 腺癌細胞,SK-BR-3細胞 RK-13細胞,兔腎細胞系DL-胱氨酸DL-Cystine質量規格:0.98
SGC-7901, 人胃腺癌細胞系 HumanN-氧基曲唑酮Trazodone N-Oxide質量規格:美國進口
CPB2 Others Human 人 CPB2 / Carboxypeptidase-B2 人細胞裂解液 (陽性對照) 4'-羥基鹽酸曲唑酮4'-Hydroxy
Trazodone HCl質量規格:美國進口
人表皮角質細胞-裂解物HEK-a L鹽酸伐倫克林標記15N3Varenicline Labeled 15N3質量規格:美國進口
HK3 Others Human 人 Hexokinase-3 / HK3 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 內酰胺伐倫克林Varenicline
Lactam質量規格:美國進口
B16BL6細胞,小鼠色素瘤細胞 VERO C1008 (E6)(非洲綠猴腎細胞) EB病毒轉化的人B細胞;KM932人參皂甙Rb2,英文名或英文縮寫:Ginsenoside Rb2,級別:AR,99.5%,規格:100克
CCL15 Protein Human 重組人 CCL15 / MIP-5 / MIP-1 delta 蛋白 (aa 22-113, His 標簽)鄰甲基對苯鹽 2,5-Diamino
sulfate,97% 615-50-9 25G 通用試劑
SH-SY5Y(人神經母細胞瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 FAS / CD95 /
APO-1 / TNFRSF6 人細胞裂解液 (陽性對照) 過氧化月桂酰; Lcuroyl pqroxidq;Dodqccnoyl pqroxidq;clpqrox C; 102-74-8
人耐VP16絨癌細胞株;JEG-3/VP16片shēng huà shì jì容量:25克
CD68 Others Human 人 CD68 / Macrosialin / Gp110 (aa 1-319) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 紅 3BNA
質粒小量提取試劑盒 Plasmid Exaction Kit Torososide A 中文名: 分子式:C38H32O15 度:%
質粒大量提取試劑盒(非柱式法) 5T Tranexamic acid 中文名:凝血酸 分子式:C8H15NO2 度:98.0%
質粒大量提取試劑盒 5T Uzarigenin digitaloside 61217-80-9 中文名: 分子式:C30H46O8 度:97.5% 關鍵詞: 嗜肺軍團菌試劑盒恒溫熒光法 夾竹桃; 強心苷; 甾苷; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫
質粒大量提取試劑盒 5T trans-4-Aminocyclohexanol 中文名: 分子式:C6H13NO 度:98.0%
志賀氏菌(SH)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
Trazodone 中文名:鹽酸曲唑酮 分子式:C19H23Cl2N5O 度:98.0%