產品名稱：γ谷氨酰半胱氨酸連接酶（GCL）比色法檢測試劑盒50管/48樣
規格 : 50管/48樣
測試方法:可見分光光度法
【友情提示】：本產品僅供科研研究使用，不得用于臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失，請仔細閱讀購買說明！
商品介紹：
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測定意義
GCL 是 GSH 合成的限速酶，GSH 對 GCL 有反饋抑制作用。GCL基因表達受多種因素調節，如氧化劑、抗氧化劑、生長因子和炎癥因子等。GCL活性高低對GSH含量和GSH/GSSG比值有重要影響。
測定原理
在ATP和Mg2+存在下，GCL催化谷氨酸和半胱氨酸合成γ-谷氨酰半胱氨酸；同時ATP去磷酸化產生無機磷分子，通過測定無機磷毫摩爾數，即可計算出GCL活性。
實驗中所需儀器及設備
可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、移液器、1ml比色皿、雙蒸水。
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特點：
1、優化設計的實驗方案，1小時即可完成
2、靈敏度高，操作便捷
3、試劑盒提供檢測所需的全套試劑
常見樣本處理方法：
1、血清（漿）樣品：直接檢測。
2、細胞或組織樣品的制備： 培養細胞：先收集細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細胞數量
（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1 的比例（建議 500萬細胞加入 1mL提取液） ，超聲波破碎細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲 3s，間隔10s，重復30 次）8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質量（g） ：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g組織，
加入 1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
實驗通用規則：
1、洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。
2、液體全部加完后，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。
3、底物有一定的毒性，終止液對皮膚有腐蝕性，應盡量避免接觸。
4、檢測前，要打開酶標儀，使之穩定10分鐘以上。
5、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。
6、將液體加到酶標孔中時，避免槍頭和孔內液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去。
7、溫浴時，要用不干膠或膠帶紙封好酶標板，防止水分的蒸發。
8、洗板時，每次洗液加入后，應靜置1分鐘，使清洗更加徹底。沒有洗板機時，倒去液體后，要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。
9、用槍吸取液體時速度不能太快，以免產生氣泡而使吸取量不準確。
10、底物是光敏感的，要在臨用前現配。
測定步驟：
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準確
3.管底加樣，不能加在管壁上
4.加樣時不能產生氣泡
2.溫浴
1.加標本后和加結合物后，應立即放入按規定的反應溫度的水浴箱。
2.各ELISA板不應疊在一起。
3.為避免蒸發，板上應加蓋，或將板平放在底部墊有濕紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后，反應的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實驗臺上，以便 不時觀察，待對照管顯色適當時，即可終止酶反應。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過程中不是反應步驟，但卻是決定實驗成敗的關鍵。
2.目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或 抗體結合的物質以及在反應過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質。
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