豬膀胱上皮細胞

公司來源可靠（源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等知名品牌），活力>95%，貼壁性好。我們從試劑、包被器皿、凍存原代細胞、新鮮原代細胞、原代細胞的分子學實驗等提供全程服務。我司擁有專業的實驗室，可無菌操作并提供相關科研項目解決方案以及實驗服務。本產品僅能用于科研

運輸和保存：
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養瓶充滿完全培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

培養方法：
收到后，在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況：
如果細胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶后放到超菌臺內，嚴格無菌操作，打開細胞培養瓶，留10ml培養液繼續培養。
如果細胞已長滿（達80-90%）。即可進行傳代，具體步驟如下：
a，棄去培養液，用PBS洗1-2次。
b，向瓶內加入1.0-2.0ml胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，吸取胰蛋白酶，加含有6ml 含10%血清的培養液，輕輕吹打細胞。
c，加入等量的的培養液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養
d，傳代比例：1:2-1:3

培養操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。      
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
組織NADPH細胞色素C還原酶(NADPHCytochromeCReductase)活性比色法定量檢測試劑盒20次  11β-Hydroxy-2'-methyl-5'βH-pregna-1,4-dieno[17,16-d]oxazole-3,20-dione  中文名：  分子式：C23H29NO4  度：98.0%

組織MUSK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次  12-Hydroxyjasmonic acid  140631-27-2  中文名：12-羥基酸  分子式：C12H18O4  度：95.5%  關鍵詞：  中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫

組織MSK2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次  14β,16β-Dihydroxy-3β-(β-D-glucopyranosyloxy)-5α-bufa-20,22-dienolide  中文名：  分子式：C30H44O10  度：98.0%

組織MSK1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次  16-Acetoxy-7-O-acetylhorminone  269742-39-4  中文名：  分子式：C24H32O7  度：98.0%  關鍵詞： 

組織MKK6激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次  17-Acetyloxy-6-chloro-1α-chloromethylpregna-4,6-diene-3,20-dione  中文名：醋酸環丙氯地孕酮  分子式：C24H30Cl2O4  度：98.0%
Ponceau SX（麗春紅 SX） 標準品 Fenbutatinoxide 4548-53-2 純品型，0.1g

胭脂紅(E124)標準品 Ponceau4RC(E124) 2611-82-7 純品型，0.1g

麗春紅3R 標準品 Salicylicacid-hexylester 608016 純品型，25mg
2，3，4，5，6-五溴乙苯 標準品 Oxabetrinil 85-22-3 純品型，0.1g

五氟磺草胺 標準品 Clostebolacetate 219714-96-2 純品型，50mg

苯氧甲基青霉素鉀鹽(青霉素V鉀鹽) 標準品 PenicillineVpotassiumsalt 132-98-9 純品型，0.1g
Acridine Orange 丫啶橙   1g/ 5g2-Amino-chloro,4-naphthoquinone279712-氨基-氯,4-萘醌

ADA   25g2-Amino-benzyloxypyridine21632-氨基-芐氧基吡啶

Adenine 腺嘌呤   g2-Amino,5-dibromobenzaldehyde95

Adenosine 腺苷；腺嘌呤核苷   5g2-Amino'-nitrodiphenyl sulfide1928412-氨基'-硝基二苯基硫醚

ADP   0mg/2mg/0mg2-Amino'-chloro-nitro benzophenone1162-氨基-硝基'-氯二苯甲酮
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養傳代及凍存：
1.2.1細胞的復蘇培養 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液（37℃預熱，8～10倍體積）離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶內，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養。
1.2.2細胞傳代 原代培養的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。
豬膀胱上皮細胞1.3 細胞形態的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態特征。
1.4 細胞的計數 常規消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數，按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液＝(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞，以0.25％胰酶消化成單細胞懸液，計數后分別接種于12個25cm2培養瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ×100％，計算貼壁率。 
1.6 生長曲線 取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養基。每天隨機取3孔，計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續計數10d，繪制細胞生長曲線。

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