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細胞介紹
該細胞系由D.J.Griad通過肺癌組織移植培養建系,患者為58歲白人男性。A549能通過胞苷二磷酸膽堿途徑合成含有高含量不飽和脂肪酸的卵磷脂。
該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶Luc基因。
細胞特性
1) 來源:肺癌
2) 形態:上皮細胞樣,多角形;貼壁生長
3) 含量:>1×10? 細胞數
4) 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
5) 用途:僅供科研使用
細胞誘導構建實驗步驟:
1. 轉染 (1)將A549細胞接種6孔板,每孔細胞數約為1×10? 個,
(2)天,細胞融合度為50%左右時用于病毒轉染,
(3)加入1mL培養基,再加20 μL Luciferase過表達慢病毒,
(4)混勻后繼續培養,
(5)12h后觀察細胞狀態,并更換為新鮮培養基,
(6)當細胞長滿板底后,傳代至T25培養瓶中。
2. 篩選:用嘌呤霉素4ug/mL抗性篩選6周,穩轉細胞記作A549+Luc。
3. 體外熒光素酶活性檢測
細胞處理:
1) 凍存細胞的復蘇:
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過夜。顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2) 細胞傳代:
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
懸浮狀態下生長的細胞,可以通過向培養瓶中添加完全培養基來維持細胞的生長狀態,一般情況下細胞密度維持在1×105~1×10^6個/mL(不同細胞對密度要求不同,)可以維持細胞的正常生長。如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中1000rpm,離心5min,棄去上清,補加1-2mL培養液后重懸混勻后將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力,后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3) 細胞凍存:
收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。

注意事項:
1.收到細胞后,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染。
2.收到細胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置2-4小時(視細胞密度而定)穩定細胞狀態。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收細胞時就整體外觀拍一張照片,觀察培養基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態,100*,200*各一張),觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據。
3.由于細胞狀態受環境、操作和運輸等多方面因素影響,故本公司只保證客戶收到細胞后一周內的細胞狀態,故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發現問題后客服人員溝通的時間證明,期間間隔時間不能大于7天。
4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要后方能丟棄。
公司正在出售的產品:
p21激活激酶2抗體
PAK2
SEC63域內含蛋白1抗體
HFM1
促甲狀腺素受體抗體(C端) Anti-TSHR (CT)
胰島素促進因子抗體(胰十二指腸源異型盒蛋白) Anti-PDX1
蛋白酶體復合物C5抗體 Anti-PRS3/PRE7
轉錄因子蛋白SIM1抗體 Anti-SIM1
甲基()單克隆抗體
Methamphetamine(4D2)
G蛋白偶聯受體80抗體
OXGR1/GPR80
EGF應答因子1抗體抗體 Anti-ZFP36L1/ERF1
絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶NEK8抗體 Anti-NEK8
視黃酸受體應答蛋白1抗體 Anti-RARRES1/TIG1
S100鈣結合蛋白A7抗體 Anti-S100A7/Psoriasin
大鼠D-甘油醛3-磷酸elisa分析檢測試劑盒
A549+luc 人肺癌細胞熒光素酶標記Rat
D-glyceraldehyde 3-phosphate ELISA Kit
人鉤端螺旋體IgM(Lebtospira)elisa分析檢測試劑盒
HumanLebtospiraIgMELISAKit
Rac1鳥苷酸酶活性分析試劑盒
小鼠Slit2 elisa分析檢測試劑盒
大鼠胰島素樣生長因子結合蛋白5(IGFBP-5)elisa檢測試劑盒
細胞NF KAPPA B P65蛋白表達流式細胞儀檢測試劑盒
轉錄因子MAFF抗體
MAFF
無精癥缺失基因1抗體
DAZ1
胰島素樣生長因子結合蛋白樣1抗體
IGFBPL1
蛋白激酶A錨定蛋白6抗體
AKAP6