操作步驟:

步驟1:配制程序凍存液,放在室溫備用或放在4℃預冷
步驟2:離心收集對數生長期的細胞(貼壁細胞消化下來離心,懸浮細胞直接離心,轉速1200rpm或250g,時間3min)
步驟3:用配制好的凍存液重懸細胞,按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中,擰緊管蓋,做好標記
步驟4:凍存管放入凍存盒,凍存盒放入-80℃冰箱過夜(24h)
步驟5:凍存管從凍存盒取出,轉移至液氮長期保存

方法二:使用無血清非程序凍存液
無血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液,無需自己配制,無需降溫盒,大大提升了便捷性。
但是,并非所有細胞都適用于這種凍存液,使用前必須做凍存測試,沒問題后再批量應用。
細胞特性
英文名稱
|
BxPC-3:BxPC3
|
貨號
|
XG-X3254
|
分類
|
人細胞系
|
種屬
|
人
|
生長特性
|
貼壁細胞
|
細胞形態
|
上皮細胞樣
|
組織來源
|
胰腺;腺癌
|
用途
|
僅供科研研究實驗
|
生長特性 貼壁細胞
細胞形態 上皮細胞樣
生長培養基 RPMI-1640+10% FBS+1% P/S
凍存條件
凍存液:55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO
溫度:液氮
培養條件
氣相:空氣,95%;CO2,5%
溫度:37℃
推薦傳代比例 1:3-1:4
推薦換液頻率 2~3次/周
背景描述 BxPC-3細胞不表達囊腫性纖維化跨膜電導調節子(CFTR),CFTR陽性的細胞株是Capan-1。
年齡(性別) 女;61歲
組織來源 胰腺;腺癌
細胞類型 腫瘤細胞
腫瘤類型 胰腺癌細胞
生物等級 1
倍增時間 ~48-60 hours
致瘤性 Yes, Tumors developed within 21
days at 100% frequency (5/5) in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7 cells.
基因表達情況 mucin; pancreas cancer
specific antigen (pancreas cancer associated antigen); carcinoembryonic antigen
(CEA)
保藏機構 ATCC; CRL-1687 BCRC; 60283
BCRJ; 0056 DSMZ; ACC-760 ECACC; 93120816
運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系。
(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理
1)收到細胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態,同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態的依據。
3)貼壁細胞:細胞在37℃培養箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,可去除培養瓶中灌液培養基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養瓶中),加入新配制的完全培養基6-8mL,放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上,可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。 收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1:2傳代 。
一.培養基及培養凍存條件準備
1) 準備1640(推薦iCell-0002)培養基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。
細胞處理

1) 凍存細胞的復蘇
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過夜。天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力,后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。
公司正在出售的產品:
腦特異性跨膜蛋白抗體
NETO2
生長分化因子1抗體
GDF1
TGFB1誘導抗凋亡因子1抗體 Anti-TIAF1
脂蛋白磷脂酶A2抗體 Anti-PAFAH/Lp-PLA2
富含脯氨酸突觸相關蛋白SHANK3抗體 Anti-SHANK3
中斷位點蛋白STIL抗體 Anti-STIL
磷酸化G氨基丁酸B型受體2抗體
phospho-GABBR2 (Ser892)
嗅覺感受器蛋白10G9抗體
OR10G9
磷酸化血管擴張刺激磷蛋白抗體 Anti-Phospho-VASP(Ser157)
谷氨酸受體2C抗體(N端) Anti-NR2C/NMDAR2C
Rap鳥嘌呤核苷酸交換因子2抗體 Anti-RAPGEF2/PDZ-GEF1
gp130結合蛋白GAM抗體 Anti-TLE5/Amino-terminal enhancer of split
大鼠白介素7(IL-7)elisa分析檢測試劑盒
BxPC-3人原位胰腺腺癌細胞IL-7 ELISA kit
人基質金屬蛋白酶14(MMP-14)elisa分析檢測試劑盒
MMP-14ELISAKit
人蛋白磷酸酶2(2A),催化亞基,β亞型(PPP2CB)elisa檢測試劑盒
組織β氨基己糖苷酶(β-hexosaminidase)活性比色法定量檢測試劑盒
小鼠粒細胞集落刺激因子(G-CSF)elisa分析檢測試劑盒
大鼠肺炎病毒抗體(PV-Ab)elisa檢測試劑盒
KPNA5蛋白抗體
KPNA5
神經細胞蠟樣質脂褐質沉積病蛋白CLN6抗體
CLN6
植物脫落酸(ABA)elisa分析檢測試劑盒
ABA ELISA Kit
人促生長釋放(GHRH)elisa分析檢測試劑盒
GHRHELISAKit