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GM09197NIGMS人類遺傳細胞庫 三核苷酸擴增細胞

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  • 產品名稱:GM09197NIGMS人類遺傳細胞庫 三核苷酸擴增細胞
  • 產品型號:XG-X7538
  • 產品展商:西格
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簡單介紹

GM09197NIGMS人類遺傳細胞庫 三核苷酸擴增細胞公司正在出售的產品:大鼠骨髓瘤細胞;IR983F 肌萎縮側索硬化癥相關蛋白4抗體 Anti-Senataxin/SETX 大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)elisa分析檢測試劑盒 NAG ELISA Kit Tie-2 ELISA kit

產品描述

細胞特性

產品名稱

GM09197NIGMS人類遺傳細胞庫 三核苷酸擴增細胞

英文名稱

GM09197NIGMS

分類

人細胞系

貨號

XG-X7538

組織來源

皮膚

形態

成纖維細胞

種屬來源;人

組織來源;皮膚

性別年齡;男性,6

生長特性;貼壁生長

細胞形態;成纖維細胞

細胞規格;1 X 106cells/T251 mL凍存管

培養條件;MEM + 10% Foetal Bovine Serum (FBS)37 , 5% CO2

凍存條件;90% FBS + 10% DMSO

傳代方法;1:3傳代,2-3天傳1

運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞

(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系。
(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理
1)收到細胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態,同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態的依據。
3)貼壁細胞:細胞在37℃培養箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,可去除培養瓶中灌液培養基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養瓶中),加入新配制的完全培養基6-8mL,放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上,可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。  收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1:2傳代 。                      
一.培養基及培養凍存條件準備
1) 準備1640(推薦iCell-0002)培養基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。

 細胞處理

1) 凍存細胞的復蘇

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過夜。天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。 
3. 輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力,后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。

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操作步驟:


步驟1:配制程序凍存液,放在室溫備用或放在4℃預冷
步驟2:離心收集對數生長期的細胞(貼壁細胞消化下來離心,懸浮細胞直接離心,轉速1200rpm或250g,時間3min)
步驟3:用配制好的凍存液重懸細胞,按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中,擰緊管蓋,做好標記
步驟4:凍存管放入凍存盒,凍存盒放入-80℃冰箱過夜(24h)
步驟5:凍存管從凍存盒取出,轉移至液氮長期保存

方法二:使用無血清非程序凍存液
無血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液,無需自己配制,無需降溫盒,大大提升了便捷性。
但是,并非所有細胞都適用于這種凍存液,使用前必須做凍存測試,沒問題后再批量應用。

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