操作步驟:

步驟1:配制程序凍存液,放在室溫備用或放在4℃預冷
步驟2:離心收集對數生長期的細胞(貼壁細胞消化下來離心,懸浮細胞直接離心,轉速1200rpm或250g,時間3min)
步驟3:用配制好的凍存液重懸細胞,按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中,擰緊管蓋,做好標記
步驟4:凍存管放入凍存盒,凍存盒放入-80℃冰箱過夜(24h)
步驟5:凍存管從凍存盒取出,轉移至液氮長期保存

方法二:使用無血清非程序凍存液
無血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液,無需自己配制,無需降溫盒,大大提升了便捷性。
但是,并非所有細胞都適用于這種凍存液,使用前必須做凍存測試,沒問題后再批量應用。
細胞特性
產品名稱
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HEPG2人肝癌細胞
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英文名稱
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HEPG2:HEPG2
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分類
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人細胞系
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貨號
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XG-X3336
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組織來源
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肝細胞癌
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形態
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上皮細胞樣
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生長特性 貼壁細胞
細胞形態 上皮細胞樣
凍存條件
凍存液:55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO
溫度:液氮
培養方案A(默認)
生長培養基:
MEM(含NEAA)+10% FBS+1% P/S
培養條件:
氣相:空氣,95%;CO2,5%, 溫度:37℃
推薦傳代比例 1:2-1:3
推薦換液頻率 2-3次/周
參考資料(來源文獻)
背景描述 Hep G2細胞是來自15歲男性白人的組織;Hep G2細胞形態為上皮細胞樣,模式染色體數為55;Hep G2細胞在抑制小鼠中不致瘤。
年齡(性別) 男性;15歲
組織來源 肝細胞癌
細胞類型 腫瘤細胞
腫瘤類型 肝母細胞瘤細胞
生物等級 BSL-1
倍增時間 ~50-60 hours
保藏機構 ATCC; HB-8065 BCRC; 60025
BCRJ; 0103 DSMZ; ACC-180 ECACC; 85011430
運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系。
(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理
1)收到細胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態,同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態的依據。
3)貼壁細胞:細胞在37℃培養箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,可去除培養瓶中灌液培養基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養瓶中),加入新配制的完全培養基6-8mL,放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上,可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。 收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1:2傳代 。
一.培養基及培養凍存條件準備
1) 準備1640(推薦iCell-0002)培養基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。
細胞處理

1) 凍存細胞的復蘇
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過夜。天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力,后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。
公司正在出售的產品:
TRANK1蛋白抗體 TRANK1
Wnt1誘導信號通路蛋白2抗體 WISP2
微管相關蛋白1B抗體 MAP1B
細胞表面趨化因子受體3抗體 CCR3
聚腺苷酸養結合蛋白4抗體 PABPC4L
口腔癌高表達的蛋白1抗體 ORAV1
AF647標記人CD25單克隆抗體 human CD25/AF647
AF750標記的波形蛋白抗體 Vimentin, Alexa Fluor 750 conjugated
富含亮氨酸重復跨膜神經元3抗體 LINGO3
鈣粘蛋白相關的神經受體2抗體 CNR2
有絲分裂激酶A/B/C抗體 Aurora A+B+C
載脂蛋白B-mRNA編輯酶復合物3C抗體 APOBEC3C
葡萄糖調節蛋白78單克隆抗體 GRP78/Bip
驅動蛋白家族成員13A抗體 KIF13A
G蛋白偶聯受體39抗體 GPR39
Kelch樣蛋白24抗體 KLHL24
SDS-PAGE電泳緩沖液10× 500ml
HEPG2人肝癌細胞CDK4蛋白表達西方雜交分析試劑盒
小鼠Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)elisa檢測試劑盒
動物組織冰凍切片糖蛋白高碘酸希爾(PAS)法
細胞半胱-7(CASPASE-7)活性熒光定量檢測試劑盒
人垂草扁桃酸(VMA)elisa分析檢測試劑盒
大鼠低密度脂蛋白受體(LDLR)elisa檢測試劑盒
小鼠轉化生長因子α(TGFα)elisa檢測試劑盒
小鼠膽囊收縮素(CCK)elisa檢測試劑盒
大鼠CXC趨化因子配體1(CXCL1)elisa檢測試劑盒
通用型基因甲基化程度定量分析試劑盒
人B-細胞趨化因子1(BLC-1/CXCL13)elisa檢測試劑盒
衍生透明質酸相關蛋白抗體
ITIH1
碳酸酐酶相關蛋白8抗體
CA8