操作步驟:

步驟1:配制程序凍存液,放在室溫備用或放在4℃預冷
步驟2:離心收集對數生長期的細胞(貼壁細胞消化下來離心,懸浮細胞直接離心,轉速1200rpm或250g,時間3min)
步驟3:用配制好的凍存液重懸細胞,按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中,擰緊管蓋,做好標記
步驟4:凍存管放入凍存盒,凍存盒放入-80℃冰箱過夜(24h)
步驟5:凍存管從凍存盒取出,轉移至液氮長期保存

方法二:使用無血清非程序凍存液
無血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液,無需自己配制,無需降溫盒,大大提升了便捷性。
但是,并非所有細胞都適用于這種凍存液,使用前必須做凍存測試,沒問題后再批量應用。
細胞特性
產品名稱
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HPAF-II 人胰腺癌細胞
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英文名稱
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HPAF-II :HPAFII
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分類
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人細胞系
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貨號
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XG-X3352
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組織來源
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胰腺
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形態
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上皮細胞樣
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細胞別稱:HPAF II; HPAFII; HPAF-2;
HPAF2; HPAF/CD18; CD18/HPAF; HPAF-II/CD18; CD-18; CD18; CD 18
種屬來源:人
年齡性別:男;44歲
組織來源:胰腺
生長特性:貼壁生長
細胞形態:上皮細胞樣
背景簡介:HPAF-II是一種人胰腺腺癌細胞系,來源于一名44歲高加索男性的腹膜腹水,該男性患有原發性胰腺腺癌,并轉移至肝臟,橫膈膜和結。
生物等級:1
細胞規格:1×106cells/T25培養瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測:無
基因表達情況:
保藏機構:ATCC; CRL-1997
培養基:MEM(ATCC改良)+10% FBS+1% P/S
培養條件:氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃
凍存條件:無血清凍存液,液氮儲存
倍增時間:26 hours (PubMed=2734279); 70
hours (PubMed=25984343)
STR鑒定位點Amelogenin:X;CSF1PO:10,11;D2S1338:16,19;D3S1358:14,18;D5S818:11,13;D7S820:10,13;D8S1179:11,12;D13S317:12;D16S539:11,13;D18S51:13;D19S433:12;D21S11:30,31;FGA:21,24;PentaD:9,13;PentaE:10,13;TH01:9;TPOX:8;vWA:17;D6S1043:12;D12S391:17;D2S441:11,14;
運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系。
(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理
1)收到細胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態,同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態的依據。
3)貼壁細胞:細胞在37℃培養箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,可去除培養瓶中灌液培養基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養瓶中),加入新配制的完全培養基6-8mL,放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上,可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。 收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1:2傳代 。
一.培養基及培養凍存條件準備
1) 準備1640(推薦iCell-0002)培養基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。
細胞處理

1) 凍存細胞的復蘇
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過夜。天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。
3. 輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力,后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。
公司正在出售的產品:
源三聚體鋅指蛋白ZHX3抗體 ZHX3
唾液酸結合性球蛋白樣凝集素12抗體 SIGLECL1
RNA結合蛋白35B抗體 RBM35B/ESRP2
Schlafen家族14抗體 SLFN14
6號染色體開放閱讀框97抗體 C6orf97
ADAMTS13重組兔單克隆抗體 ADAMTS13
甲狀腺過氧化物酶抗體 Thyroid peroxidase
堿性磷酸酶(類胎盤型)抗體 ALPPL2
胰羧肽酶A6抗體 CPA6
抑癌蛋白DKK1抗體 DKK1
多腺苷二磷酸多聚酶抗體 [KO驗證抗體] PARP1
泛素羧基末端水解酶5單克隆抗體 USP5
GALNT3蛋白抗體 GALNT3
G蛋白結合蛋白RAB相互作用蛋白4抗體 RAB11FIP4
莫洛尼白血病病毒蛋白10抗體 Mov10
內質網退化蛋白3抗體 DERL3
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HPAF-II 人胰腺癌細胞小鼠骨成型蛋白7(BMP-7)elisa分析檢測試劑盒
人β防御素(β-Defensin)elisa檢測試劑盒
甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活性終點比色法定量檢測試劑盒
豬ELISAelisa檢測試劑盒
大鼠去甲腎上腺素(NE)elisa檢測試劑盒
MUELLER HINTON瓊脂平板
兔甲狀旁腺(PTH)elisa檢測試劑盒
人白介素17A(IL-17A)elisa檢測試劑盒
血液尿激酶(UROKINASE)活性比色法定量檢測試劑盒
小鼠牛小腸堿性磷酸酶(CIAP)elisa檢測試劑盒
大鼠骨形成蛋白6(BMP-6)elisa檢測試劑盒
猴甲狀腺素(T4)elisa分析檢測試劑盒
T4 ELISA kit
人反三碘甲狀腺原氨酸(rT3)elisa分析檢測試劑盒
rT3ELISAKit