您需要準備好細胞所要用到的培養基和相關(guān)試劑,雖然所有的貼壁,半貼壁或者懸浮細胞處理方式差不多,但是不同的實(shí)驗室培養條件和處理力度還有試劑的批間差這些問(wèn)題存在,也會(huì )導致對細胞處理不當,或者環(huán)境的不適應而造成細胞的死亡。
1、收到細胞,第1時(shí)間要觀(guān)察細胞形態(tài)是否正常,對于貼壁細胞則要注意看貼壁情況是否很好,觀(guān)察細胞密度有疑議及時(shí)咨提供細胞的技術(shù)人員。由于運輸的時(shí)間或者溫度的變化,很多貼壁細胞在盛滿(mǎn)培養基的瓶子里生長(cháng)的狀態(tài)和平時(shí)有點(diǎn)不一樣,主要是貼壁牢固問(wèn)冋題。比如29紅,平時(shí)貼壁就不是很牢,在裝滿(mǎn)的培養基瓶子里面,會(huì )發(fā)生大片的脫落,細胞聚集在一起,但是細胞生長(cháng)還是正常的,通過(guò)離心收集,加以胰酶的消化,重新打散,又可以正常的貼壁生長(cháng)當通過(guò)上一步的觀(guān)察,細胞初步?jīng)]有任何問(wèn)題時(shí),進(jìn)行下一步操作。
2、當收到的細胞密達到8%左右時(shí),則處理如下：
棄除瓶中大部分培養基,僅保皕5到1∽L培養所需的常規培養基;或更換新鮮的培養基,置于培養箱中,隨后毎夭觀(guān)察。細胞在低于正常生長(cháng)溫度情況下,會(huì )調整為靜止期,或者慢速生長(cháng)期,必須恢復37度的環(huán)境至少3個(gè)小時(shí)左右,才能重新調整到接近對數生長(cháng)期的狀態(tài),在對數生長(cháng)期進(jìn)行細胞的傳代會(huì )大大增加傳代的成功率,和細胞的存活率。
3、如果經(jīng)第1步觀(guān)察發(fā)現細胞密度超過(guò)90%,并且細胞狀態(tài)很好時(shí),則復溫后2個(gè)小時(shí)需要立即傳代。傳代的比例應依據不同的細胞而定。對于生長(cháng)比較快,狀態(tài)穩定,不易受外界景響的細胞可以一次多傳幾瓶;對于生長(cháng)較慢,細胞比較薄,狀態(tài)容易波動(dòng)的細胞類(lèi)型,一些,保證每瓶細胞密度大些,便于穩定生長(cháng)。至于一些比較陌生的細胞,第1次處理也可以照第2種情況